Chuẩn bị và quan sát mẫu sinh học cho kính hiển vi điện tử
Độ phân giải của kính hiển vi phụ thuộc vào bước sóng của ánh sáng được sử dụng. Kính hiển vi điện tử, xuất hiện vào năm 1933, đạt được độ phân giải cao hơn đáng kể so với kính hiển vi quang học do sử dụng chùm tia điện tử có bước sóng ngắn hơn nhiều so với ánh sáng khả kiến làm nguồn sáng. Các nguồn sáng khác nhau cũng xác định hàng loạt điểm khác biệt giữa kính hiển vi điện tử và kính hiển vi quang học.
Dựa trên sự khác biệt về nguyên tắc chụp ảnh chùm tia điện tử và cách chúng tác động lên mẫu, kính hiển vi điện tử hiện đại đã phát triển thành nhiều loại. Hiện nay, được sử dụng phổ biến nhất là kính hiển vi điện tử truyền qua và kính hiển vi điện tử quét. Cái trước có tổng độ phóng đại có thể thay đổi trong khoảng 1000-10000000 lần, trong khi cái sau có tổng độ phóng đại có thể thay đổi trong khoảng 20-300000 lần. Thí nghiệm này chủ yếu giới thiệu việc chuẩn bị hai loại mẫu kính hiển vi, kính hiển vi điện tử truyền qua và kính hiển vi điện tử quét.
2, Thiết bị
1. Chủng Escherichia coli nghiêng.
2. Dung dịch hoặc thuốc thử: pentyl axetat, axit sunfuric đậm đặc, etanol khan, nước vô trùng, dung dịch nước natri phosphotungstate 2% (pH 6,5-8,0), dung dịch polyvinyl formaldehyd 0,3% (hòa tan trong cloroform), cytochrom c, amoni axetat, plasmid pBR322.
3. Dụng cụ hoặc dụng cụ khác bao gồm kính hiển vi quang học thông thường, lưới đồng, phễu sứ, cốc thủy tinh, đĩa petri, ống nhỏ giọt vô trùng, nhíp vô trùng, ghim, phiến kính, đĩa đếm, máy phủ chân không, máy sấy điểm tới hạn, v.v.
3, Các bước thao tác
(1) Chuẩn bị và quan sát mẫu cho kính hiển vi điện tử truyền qua
1. Xử lý lưới kim loại
Mẫu của kính hiển vi quang học được đặt trên một phiến kính để quan sát. Tuy nhiên, trong gương truyền, vì các electron không thể xuyên qua tấm kính nên vật liệu lưới chỉ có thể được sử dụng làm chất mang, thường được gọi là lưới mang. Lưới mang có thể được chia thành nhiều thông số kỹ thuật khác nhau do vật liệu và hình dạng khác nhau, trong đó lưới đồng có lưới 200-400 (số lỗ) thường được sử dụng. Lưới đồng phải được xử lý trước khi sử dụng để loại bỏ bụi bẩn và giữ sạch, nếu không sẽ ảnh hưởng đến chất lượng của màng hỗ trợ và độ rõ nét của ảnh mẫu. Lưới đồng 400 lưới được sử dụng trong thí nghiệm này có thể được xử lý bằng phương pháp sau: đầu tiên ngâm và thả nổi bằng pentyl axetat trong vài giờ, sau đó rửa sạch nhiều lần bằng nước cất, cuối cùng nhúng và thả lưới đồng vào etanol khan để khử nước. Nếu lưới đồng vẫn không sạch sau các phương pháp trên, có thể ngâm trong axit sunfuric đậm đặc pha loãng (1: 1) trong 1-2 phút hoặc đun sôi trong dung dịch NaOH 1% trong vài phút, rửa sạch nhiều lần bằng nước cất, sau đó khử nước trong etanol khan để sử dụng sau.
