Ưu điểm của kính hiển vi laser đồng tiêu là gì
So với kính hiển vi trường rộng truyền thống, kính hiển vi đồng tiêu quét laser có các đặc điểm về độ nét cao, độ phân giải cao và độ nhạy cao. Nó được sử dụng rộng rãi trong lĩnh vực y sinh và đã trở thành một công cụ hình ảnh quan trọng trong lĩnh vực này. Tại sao confocal lại có thể nhận được nhiều sự yêu thích như vậy, và nó có những ưu điểm gì? Bài viết này liệt kê ba khía cạnh để thảo luận về những lợi thế của tiêu điểm.
Chỉ thu tín hiệu trên mặt phẳng tiêu cự giúp hình ảnh rõ nét không bị nhòe
Vậy làm thế nào để kính hiển vi đồng tiêu đạt được lợi thế này? Điều này là do phần cứng tiêu điểm quan trọng—lỗ kim, như thể hiện trong Hình 2. Đó là một lỗ nhỏ ở phía trước máy dò và được đặt trên mặt phẳng quang học liên hợp với mặt phẳng tiêu cự của mẫu. Khi ánh sáng kích thích chiếu vào mẫu, cả mặt phẳng tiêu điểm và mặt phẳng không tiêu cự của vùng mẫu sẽ bị kích thích tạo tín hiệu huỳnh quang, điều chỉnh kích thước lỗ kim phù hợp (thường là 1 Au) để tín hiệu huỳnh quang trên mặt phẳng tiêu cự (đường chấm màu xanh lục) có thể là Tín hiệu huỳnh quang (đường đứt nét màu đỏ và xanh lam) đi qua lỗ kim để đến máy dò ngoài mặt phẳng tiêu cự không thể đến máy dò qua lỗ kim. Thông qua việc bổ sung các lỗ kim phần cứng, tiêu điểm có thể thu được hình ảnh rõ nét và chất lượng cao mà không cần thay đổi phương pháp chế tạo kính hiển vi huỳnh quang thông thường.
Do sự tồn tại của lỗ kim, chúng ta chỉ có thể thu được tín hiệu trên mặt phẳng tiêu điểm và thu được hình ảnh hai chiều có độ phân giải cao. Bằng cách liên tục điều chỉnh vị trí trục Z, có thể thu được hình ảnh hai chiều ở các vị trí trục Z khác nhau và có thể thu được một loạt hình ảnh "lát cắt quang học" liên tục. Sau khi có được các lát cắt quang học này, mô-đun 3D được trang bị phần mềm thiết bị có thể được sử dụng để tái tạo lại hình ảnh 3D nhằm tạo ra hình ảnh 3D rõ ràng. Bộ sưu tập hình ảnh lát cắt quang học liên tục, không phá hủy này thực hiện chức năng của "CT tế bào".
Độ chính xác của kết quả colocalization có liên quan mật thiết đến độ phân giải của hình ảnh, vì vậy chúng ta cần chọn phương pháp hình ảnh có độ phân giải cao hơn khi thực hiện các thí nghiệm colocalization. So với kính hiển vi truyền thống, kính hiển vi đồng tiêu đã trở thành một công cụ mạnh mẽ cho nghiên cứu colocalization do lợi thế về độ phân giải cao của nó.
Do sự tồn tại của giới hạn nhiễu xạ, độ phân giải quang học đồng tiêu thông thường là khoảng 200nm. Khi chúng ta cần quan sát các cấu trúc lớn hơn 200nm, tiêu điểm có thể xác định chính xác mức độ tập trung. Nếu cần phân tích tập trung hóa, có thể chọn mô-đun phân tích tập trung hóa được trang bị trong phần mềm tiêu điểm.
