Hai phương pháp quan sát thường được áp dụng cho kính hiển vi
1, Quan sát trường tối
Trường nhìn tối thực chất là chiếu sáng trường tối. Đặc điểm của nó khác với trường nhìn sáng, vì nó không quan sát trực tiếp ánh sáng chiếu sáng mà quan sát ánh sáng phản xạ hoặc khúc xạ của vật thể được kiểm tra. Do đó, trường nhìn trở thành nền tối, trong khi vật thể được kiểm tra hiển thị hình ảnh sáng
Nguyên lý của trường tối dựa trên hiện tượng Tyndall quang học, trong đó mắt người không thể quan sát được các hạt bụi khi tiếp xúc với ánh sáng mạnh do nhiễu xạ do ánh sáng mạnh gây ra. Nếu ánh sáng chiếu xiên vào nó, các hạt dường như tăng thể tích do sự phản xạ ánh sáng, khiến mắt người có thể nhìn thấy chúng.
Phụ kiện đặc biệt cần thiết để quan sát trường tối là đèn chiếu trường tối Đặc điểm của nó là không cho chùm ánh sáng xuyên qua vật thể từ dưới lên trên mà thay đổi đường đi của ánh sáng hướng xiên về phía vật thể, để ánh sáng chiếu sáng không đi trực tiếp vào thấu kính vật kính mà sử dụng hình ảnh sáng được hình thành bởi ánh sáng phản xạ hoặc nhiễu xạ trên bề mặt vật thể được kiểm tra. Độ phân giải của quan sát trường tối cao hơn nhiều so với quan sát trường sáng, đạt tới 0,02-0,004
2, Phương pháp kiểm tra gương tương phản pha
Việc phát minh thành công kính hiển vi tương phản pha trong quá trình phát triển kính hiển vi quang học là một thành tựu quan trọng trong công nghệ kính hiển vi hiện đại. Chúng ta biết rằng mắt người chỉ có thể phân biệt được bước sóng (màu sắc) và biên độ (độ sáng) của sóng ánh sáng. Đối với mẫu vật sinh học không màu và trong suốt, khi ánh sáng truyền qua, bước sóng và biên độ không thay đổi nhiều nên khó quan sát mẫu vật ở trường sáng
Kính hiển vi tương phản pha sử dụng sự khác biệt về độ dài đường quang của vật thể được kiểm tra để kiểm tra gương, sử dụng hiệu quả hiện tượng giao thoa ánh sáng để biến đổi độ lệch pha mà mắt người không thể phân biệt được thành chênh lệch biên độ có thể phân biệt được. Ngay cả những chất không màu và trong suốt cũng có thể nhìn thấy rõ ràng. Điều này tạo điều kiện thuận lợi rất nhiều cho việc quan sát các tế bào sống, do đó kính hiển vi tương phản pha được sử dụng rộng rãi trong kính hiển vi đảo ngược
Nguyên lý cơ bản của kính hiển vi tương phản pha là chuyển đổi độ chênh lệch đường quang của ánh sáng nhìn thấy truyền qua mẫu vật thành chênh lệch biên độ, từ đó cải thiện độ tương phản giữa các cấu trúc khác nhau và làm cho chúng rõ ràng và nhìn thấy được. Sau khi đi qua mẫu vật, ánh sáng bị khúc xạ, lệch khỏi đường quang ban đầu và bị trễ 1/4 λ (bước sóng). Nếu độ chênh lệch đường quang tăng hoặc giảm thêm 1/4 λ thì độ chênh lệch đường quang trở thành 1/2 λ và sự giao thoa giữa hai chùm ánh sáng tăng hoặc giảm sau khi trục được kết hợp, cải thiện độ tương phản Về mặt cấu trúc, kính hiển vi tương phản pha có hai điểm khác biệt đặc biệt so với kính hiển vi quang học thông thường:
1. Một màng chắn hình khuyên được đặt giữa nguồn sáng và tụ điện, chức năng của nó là tạo thành một hình nón ánh sáng rỗng đi qua tụ quang và tập trung vào mẫu vật
2. Tấm pha góc: Một tấm pha được phủ magie florua được thêm vào thấu kính vật kính, có thể làm trễ pha của ánh sáng trực tiếp hoặc nhiễu xạ 1/4 λ. Nó có thể được chia thành hai loại:
(1) . Tấm pha A+: Trì hoãn ánh sáng trực tiếp 1/4 λ và thêm hai bộ sóng ánh sáng sau khi kết hợp các trục. Biên độ tăng lên và cấu trúc mẫu vật trở nên sáng hơn môi trường xung quanh, tạo thành độ tương phản sáng (hoặc độ tương phản âm)
(2) . Tấm pha B+: Trì hoãn ánh sáng nhiễu xạ 1/4 λ và trừ sóng ánh sáng sau khi kết hợp trục của hai bộ tia sáng, dẫn đến biên độ giảm và tạo thành độ tương phản tối (hoặc độ tương phản dương). Cấu trúc trở nên tối hơn môi trường xung quanh
