Nguyên lý và đặc điểm cấu tạo của kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang sử dụng một điểm có hiệu suất phát sáng cao để phát ra ánh sáng có bước sóng nhất định (như ánh sáng cực tím 3650 in hoặc ánh sáng xanh tím 4200 in) qua hệ thống kính lọc làm ánh sáng kích thích để kích thích các chất huỳnh quang trong mẫu vật phát ra huỳnh quang. màu sắc khác nhau Sau đó, quan sát qua độ phóng đại của vật kính và thị kính. Bằng cách này, dưới một nền tương phản mạnh, ngay cả khi huỳnh quang rất yếu, rất dễ xác định và có độ nhạy cao. Nó chủ yếu được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc và chức năng tế bào và thành phần hóa học. Cấu trúc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang bao gồm kính hiển vi quang học thông thường cộng với một số phụ kiện (chẳng hạn như nguồn sáng huỳnh quang, bộ lọc kích thích, bộ tách chùm tia hai màu và bộ lọc chặn, v.v.). Nguồn sáng huỳnh quang—thường sử dụng đèn thủy ngân áp suất cực cao (50-200W), có thể phát ra ánh sáng có nhiều bước sóng khác nhau, nhưng mỗi chất huỳnh quang có bước sóng kích thích tạo ra huỳnh quang mạnh nhất, do đó, bộ lọc kích thích ( Nói chung, có các bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, xanh lam và xanh lục), chỉ cho phép ánh sáng kích thích có bước sóng nhất định đi qua và chiếu xạ mẫu vật, đồng thời hấp thụ ánh sáng khác. Sau khi mỗi chất được chiếu xạ bằng ánh sáng kích thích, nó sẽ phát ra huỳnh quang nhìn thấy được với bước sóng dài hơn bước sóng chiếu xạ trong thời gian rất ngắn. Huỳnh quang là cụ thể và thường yếu hơn ánh sáng kích thích. Để quan sát huỳnh quang cụ thể, phải thêm chức năng chặn (hoặc triệt tiêu) phía sau vật kính và được sử dụng cùng với nó.
Sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi thông thường
1. Phương pháp chiếu sáng thường là episcopic, tức là chiếu nguồn sáng lên mẫu qua vật kính;
2. Nguồn sáng là tia cực tím, bước sóng ngắn hơn và độ phân giải cao hơn so với kính hiển vi thông thường;
3. Có hai bộ lọc đặc biệt, bộ lọc phía trước nguồn sáng được sử dụng để lọc ánh sáng khả kiến và bộ lọc nằm giữa thị kính và vật kính được sử dụng để lọc tia cực tím để bảo vệ mắt người.
Kính hiển vi huỳnh quang cũng là một loại kính hiển vi quang học, điểm khác biệt chính là bước sóng kích thích của hai loại này là khác nhau. Điều này quyết định sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường về cấu tạo và cách sử dụng.
Kính hiển vi huỳnh quang là một công cụ thiết yếu trong hóa tế bào miễn dịch huỳnh quang. Nó được cấu tạo bởi các bộ phận chính như nguồn sáng, hệ thống tấm lọc và hệ thống quang học. Đó là sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định để kích thích mẫu vật phát ra huỳnh quang và quan sát hình ảnh huỳnh quang của mẫu vật bằng cách khuếch đại hệ thống vật kính và thị kính.
