Yêu cầu chuẩn bị mẫu vật cho kính hiển vi huỳnh quang
Yêu cầu chuẩn bị mẫu cho kính hiển vi huỳnh quang
(1) Cầu trượt kính
Độ dày của kính trượt phải nằm trong khoảng 0.8-L2mm. Một phiến kính quá dày sẽ hấp thụ nhiều ánh sáng hơn và mặt khác không thể tập trung ánh sáng kích thích vào mẫu vật. Các phiến kính phải nhẵn, có độ dày đồng đều và không có hiện tượng tự phát huỳnh quang rõ ràng. Đôi khi slide thạch anh được sử dụng.
(2) Kính che
Độ dày của kính phủ khoảng 0.17mm, nhẵn. Để tăng cường ánh sáng kích thích, cũng có thể sử dụng kính che phủ giao thoa, là loại kính che phủ đặc biệt được phủ một số lớp chất (chẳng hạn như magiê florua) có tác dụng giao thoa khác nhau đối với ánh sáng có bước sóng khác nhau, có thể tạo ra huỳnh quang mịn. Ánh sáng kích thích được truyền qua và ánh sáng kích thích bị phản xạ, và ánh sáng kích thích bị phản xạ này có thể kích thích mẫu vật.
(3) Mẫu vật
Các lát mô hoặc các mẫu vật khác không được quá dày. Nếu độ dày quá dày, phần lớn ánh sáng kích thích sẽ được tiêu thụ ở phần dưới của mẫu vật, trong khi phần trên được quan sát trực tiếp bởi vật kính không thể được kích thích hoàn toàn. Ngoài ra, huỳnh quang gây ra bởi các tế bào chồng chéo hoặc tạp chất, nhuộm nền không đặc hiệu ảnh hưởng đến phán đoán.
(4) dầu gương
Thông thường, khi quan sát mẫu vật bằng kính hiển vi huỳnh quang trường tối và kính hiển vi ngâm dầu, phải sử dụng dầu ngâm. Tốt nhất là sử dụng dầu ngâm đặc biệt không huỳnh quang. Glycerin cũng có thể được sử dụng để thay thế, cũng có thể sử dụng parafin lỏng, nhưng chỉ số khúc xạ thấp, ảnh hưởng một chút đến chất lượng hình ảnh.
Tìm hiểu khối ánh sáng của kính hiển vi huỳnh quang
Huỳnh quang là ánh sáng mà các electron trong một chất hấp thụ năng lượng ánh sáng từ trạng thái năng lượng thấp sang trạng thái năng lượng cao, sau đó giải phóng ánh sáng khi nó trở lại trạng thái năng lượng thấp. Đó là ánh sáng bức xạ phi nhiệt độ—sự phát quang. Đó là: chất đó hấp thụ ánh sáng có bước sóng ngắn, chuyển sang trạng thái kích thích và phát ra ánh sáng có bước sóng dài.
Cho dù đó là sự tự phát huỳnh quang của chất, thuốc nhuộm huỳnh quang hay protein huỳnh quang thể hiện bằng phản ứng tổng hợp, nó cần được kích thích bởi một bước sóng ánh sáng cụ thể (Kích thích). Sau khi các electron di chuyển và mất năng lượng, chúng phát ra ánh sáng có bước sóng dài cụ thể (Phát xạ). , có thể được thu thập bởi hệ thống phát hiện để đạt được chức năng xác định huỳnh quang cụ thể.
Khối đèn huỳnh quang là gì?
Trong quan sát và chụp ảnh bằng kính hiển vi huỳnh quang, khối ánh sáng huỳnh quang cung cấp ánh sáng kích thích có bước sóng cụ thể và ánh sáng phát xạ bước sóng dài tương ứng, do đó tín hiệu huỳnh quang có thể được thu thập bằng mắt thường, màn hình hiển thị hoặc máy ảnh. Do đó, khối ánh sáng huỳnh quang xác định những gì có thể được phát hiện Thiết bị chính của tín hiệu huỳnh quang, các đặc điểm của nó bao gồm EX: tham số bộ lọc bước sóng kích thích, EM: tham số bộ lọc bước sóng phát xạ và DM: tham số gương lưỡng sắc. Lấy khối ánh sáng DAPI của kính hiển vi huỳnh quang tích hợp Revolve làm ví dụ, EX: 385/30, EM: 450/50, DM: 425.
The light emitted by the light source passes through DAPI EX to obtain excitation light in a specific wavelength range, that is, light of 385±15nm, which specifically excites fluorescent substances that can only be excited within this range; the DM dichroic mirror separates the excitation light from the fluorescence Optical elements, as special mirrors, reflect only specific wavelengths of light and allow all other wavelengths to pass through, so only >Ánh sáng 425nm có thể được truyền tới EM; Bộ lọc phát xạ EM được sử dụng để tách huỳnh quang phát ra từ fluorophore khỏi các phần tử Quang học nền khác để tách ánh sáng. Bộ lọc phát xạ truyền ánh sáng ở bước sóng huỳnh quang qua gương lưỡng sắc đồng thời chặn tất cả ánh sáng khác rò rỉ từ nguồn sáng kích thích (phản xạ từ mẫu hoặc quang học). Bước sóng ánh sáng phát ra lớn hơn EM được quan sát, nghĩa là chỉ ánh sáng trong phạm vi 450 ± 25nm đi vào hệ thống phát hiện. Lựa chọn thích hợp các bộ lọc EX, EM và phân đôi DM có thể giúp các nhà nghiên cứu đạt được tỷ lệ tín hiệu trên tạp âm (S/N) cao hơn.
