Tất cả các vật kính của kính hiển vi quang học đều bắt nguồn từ công thức Gaussian 1/'- 1/'=1/f. Đối với vật kính có tiêu cự cố định, một khi hệ thống được xác định, tiêu cự f không thay đổi và khoảng cách ảnh / cũng không thay đổi. Do đó, chỉ bằng cách điều chỉnh vị trí của bề mặt vật thể dọc theo trục quang, có thể thu được hình ảnh vật kính rõ ràng (thường được gọi là hình ảnh chính của vật kính). Hình ảnh chính của vật kính đi qua giao diện quang học (về cơ bản là thấu kính vật kính chiếu) và hình ảnh chính của vật kính được tái tạo trên bề mặt mục tiêu ánh sáng CCD. Có thể thấy rằng cái gọi là lấy nét đề cập đến quá trình làm việc thay đổi vị trí tương đối của bề mặt vật thể và vật kính dọc theo hướng trục ánh sáng, sao cho mối quan hệ giữa hình ảnh vật thể và mối quan hệ Gaussian được thỏa mãn, vì vậy để thu được ảnh ban đầu rõ nét của vật kính. Như đã đề cập ở trên, có hai loại kỹ thuật lấy nét: thủ công và tự động. Lấy nét tự động có thể được chia thành lấy nét trực tiếp và lấy nét gián tiếp theo phương pháp phát hiện tín hiệu. Phương pháp xử lý ảnh lấy nét tự động là phương pháp lấy nét trực tiếp. Phương pháp này thực hiện lấy nét tự động bằng cách xử lý hình ảnh về chất lượng hình ảnh, là kết quả của công thức Gaussian 1/I'- 1/I' đối với hình ảnh kính hiển vi so với vật kính của kính hiển vi quang học.=1/f'. Đối với vật kính có tiêu cự cố định, khi đã xác định được hệ thì tiêu cự f không đổi, khoảng cách ảnh I cũng không đổi. Do đó, chỉ bằng cách điều chỉnh vị trí của bề mặt vật thể dọc theo trục quang, có thể thu được hình ảnh vật kính rõ ràng (thường được gọi là hình ảnh chính của vật kính). Hình ảnh chính của vật kính đi qua giao diện quang học (về cơ bản là thấu kính vật kính chiếu) và hình ảnh chính của vật kính được tái tạo trên bề mặt mục tiêu ánh sáng CCD. Có thể thấy rằng cái gọi là lấy nét đề cập đến quá trình làm việc thay đổi vị trí tương đối của bề mặt vật thể và vật kính dọc theo hướng của trục quang học, sao cho mối quan hệ giữa hình ảnh vật thể và mối quan hệ Gaussian được thỏa mãn , sao cho thu được ảnh ban đầu rõ nét của vật kính.
Như đã đề cập ở trên, có hai loại kỹ thuật lấy nét: thủ công và tự động. Lấy nét tự động có thể được chia thành lấy nét trực tiếp và lấy nét gián tiếp theo phương pháp phát hiện tín hiệu. Lấy nét tự động của phương pháp xử lý hình ảnh là phương pháp lấy nét trực tiếp, thực hiện lấy nét tự động thông qua xử lý hình ảnh chất lượng hình ảnh, đây là phương pháp lấy nét tự động lý tưởng cho kính hiển vi. Thiết bị lấy nét kính hiển vi tự động được phát triển cũng thực hiện lấy nét tự động dựa trên phương pháp xử lý hình ảnh.
