Máy đo pH - Xác định và điều chỉnh pH môi trường
Tất cả các vi sinh vật đều bị ảnh hưởng bởi độ pH của môi trường mà chúng sống. Thông thường, sự hiện diện của các loài chọn lọc thu hẹp phạm vi pH mà chúng phát triển. Đôi khi, độ axit hoặc độ kiềm của môi trường cũng có thể đóng vai trò là yếu tố chọn lọc tăng trưởng. Tuy nhiên, đối với môi trường thử nghiệm sinh hóa, phạm vi pH trong đó vi sinh vật thể hiện hoạt động tk trong chất nền hẹp hơn phạm vi pH cần thiết cho sự phát triển: do đó, điều quan trọng là phải điều chỉnh độ pH của môi trường theo phạm vi dự kiến. Khi phòng thí nghiệm chuẩn bị môi trường theo thành phần môi trường, độ pH phải được kiểm tra và điều chỉnh. Cần phải chỉ ra rằng ngay cả đối với môi trường khử nước tổng hợp pha sẵn do nhà sản xuất cung cấp (đặc biệt đối với một số môi trường khử nước gốc), độ pH cuối cùng cần được đo sau khi tạo môi trường thí nghiệm.
Cách chính xác nhất để đo độ pH của môi trường là dùng máy đo pH. Trước khi sử dụng, nó phải được hiệu chuẩn bằng dung dịch đệm chuẩn có độ pH đã biết (thường pH từ 4 đến 7). Rửa sạch điện cực của máy đo pH bằng nước cất và nhúng điện cực vào môi trường nuôi cấy trong cốc, sau đó đọc độ pH của môi trường nuôi cấy từ thang đo của máy đo pH. Mỗi nhà sản xuất cung cấp hướng dẫn vận hành chi tiết cho từng loại máy đo pH.
Khi chuẩn bị môi trường nuôi cấy, PH có thể được điều chỉnh dễ dàng bằng cách sử dụng máy đo pH có khuấy cơ học. Môi trường nuôi cấy phải được chuẩn bị trong vật chứa (chẳng hạn như cốc lớn) có thể khuấy liên tục. hoặc nam châm bọc Teflon. Độ pH của môi trường chứa thạch cần được điều chỉnh sau khi rã đông, điều này có thể dễ dàng thực hiện bằng máy khuấy từ gia nhiệt. Khi điều chỉnh độ pH, trước tiên hãy sử dụng dung dịch đệm chuẩn có độ pH đã biết để hiệu chỉnh máy đo pH. Sau đó đặt điện cực composite và nhiệt kế điện trở (nếu có) vào môi trường, thêm từ từ một lượng axit clohydric và natri hydroxit thích hợp từ phần cuối của cốc ra khỏi điện cực, để môi trường có thể đạt và duy trì độ pH cần thiết.
Việc bù nhiệt độ của máy đo pH nên tính đến ảnh hưởng của nhiệt độ lên hệ thống điện cực: trong một số dung dịch pha loãng và môi trường, độ pH thay đổi đáng kể theo nhiệt độ. Đối với môi trường lỏng và dung dịch pha loãng, độ pH thường có thể được điều chỉnh và đo ở 25 độ hoặc ở nhiệt độ mà chúng được sử dụng.
Độ pH của môi trường thạch phải được điều chỉnh sau khi hòa tan và nhiệt độ hòa tan trên 45 độ: do đó, độ pH của môi trường rắn phải được xác định ở nhiệt độ sử dụng. Tại thời điểm này, nên sử dụng điện cực composite đầu phẳng và hiệu chỉnh bù nhiệt độ của máy đo pH phải được hiệu chuẩn thủ công. Khi chuẩn bị môi trường nuôi cấy, nếu xác định được pH của môi trường nuôi cấy có sự khác biệt giữa trạng thái nóng chảy và trạng thái đông đặc thì có nghĩa là đã có sai sót trong việc điều chỉnh pH.
Tương tự như vậy, khi môi trường đã chuẩn bị được khử trùng bằng nhiệt (ví dụ: hấp khử trùng), nó cũng có thể bị thay đổi độ pH. Đối với môi trường khử nước, nhà sản xuất đã cân nhắc điều này và thường không cần điều chỉnh độ pH, nhưng cần kiểm tra cẩn thận độ pH của môi trường sẽ sử dụng. Nếu độ pH của môi trường thạch khô phải được điều chỉnh trong quá trình hòa tan lại hoặc chuẩn bị, thì tốt nhất là điều chỉnh độ pH bằng axit clohydric đã khử trùng qua bộ lọc và dung dịch natri hydroxit sau bước khử trùng để tránh sự hình thành quá nhiệt của môi trường. Khi chuẩn bị môi trường với các nguyên liệu thô hoặc dược phẩm khác nhau, phải kiểm tra độ pH của môi trường sau khi hấp khử trùng. Ngoài ra, nếu thấy pH của môi trường thay đổi như nhau sau mỗi lần hấp khử trùng thì có thể điều chỉnh pH thích hợp khi chuẩn bị môi trường. Tuy nhiên, vẫn cần xác định pH cuối cùng của môi trường sau khi khử trùng.
