Phương pháp đếm trực tiếp kính hiển vi vi sinh vật
Các bước thực nghiệm (phương pháp đếm trực tiếp trên kính hiển vi vi sinh vật)
1. Pha loãng
Pha loãng hỗn dịch men bia một cách thích hợp. Nếu dung dịch vi khuẩn không đậm đặc thì không cần thiết phải pha loãng.
2. Phòng kiểm tra và đếm kính hiển vi
Trước khi thêm mẫu, tiến hành kiểm tra bằng kính hiển vi buồng đếm của bảng đếm. Nếu có bụi bẩn thì cần phải làm sạch trước khi đếm.
3. Thêm mẫu
Đậy đĩa đếm tế bào máu sạch và khô bằng một tấm kính đậy kín, sau đó dùng ống nhỏ giọt có miệng nhỏ vô trùng để nhỏ một giọt nhỏ (không quá nhiều) dung dịch men đã pha loãng từ mép tấm đậy kính. Cho dung dịch vi khuẩn đi vào buồng đếm dọc theo khe hở bằng sự thấm mao dẫn. Nói chung, buồng đếm có thể chứa đầy dung dịch vi khuẩn. Hãy cẩn thận để không tạo ra bong bóng.
4. Đếm bằng kính hiển vi
Sau khi để yên 5 phút, đặt bảng đếm tế bào máu lên bệ kính hiển vi, trước tiên sử dụng kính hiển vi công suất thấp để xác định vị trí của phòng đếm, sau đó chuyển sang kính hiển vi công suất cao để đếm. Nếu thấy dung dịch vi khuẩn quá đặc hoặc quá loãng trước khi đếm thì phải điều chỉnh lại độ pha loãng trước khi đếm. Yêu cầu pha loãng mẫu chung là phải có khoảng 5-10 thể vi khuẩn trên mỗi tế bào nhỏ. Chọn 5 ô từ mỗi phòng đếm (4 ô góc và ô trung tâm tùy chọn) để đếm. Sợi nấm nằm trên đường lưới thường chỉ đếm ở đường trên và đường bên phải. Nếu nấm men nảy mầm và kích thước của chồi đạt đến một nửa tế bào mẹ thì sẽ tiến hành đếm hai vi khuẩn. Để đếm một mẫu, hàm lượng vi khuẩn trong mẫu phải được tính toán dựa trên các giá trị thu được từ hai buồng đếm.
5. Làm sạch bảng đếm tế bào máu
Sau khi sử dụng, rửa sạch bảng đếm tế bào máu bằng cột nước trên vòi nước. Không sử dụng vật cứng để rửa. Sau khi gội, hãy tự phơi khô hoặc sấy khô bằng máy sấy tóc. Kiểm tra bằng kính hiển vi, quan sát xem có tồn sót xác vi khuẩn hoặc các chất kết tủa khác trong từng tế bào nhỏ hay không. Nếu chưa sạch thì phải giặt nhiều lần cho đến khi sạch.
