Lợi ích của kính hiển vi đa photon quét laser được nâng cao
Kính hiển vi đa photon quét bằng laser là một cải tiến lớn trong kính hiển vi quang học, chủ yếu ở khả năng quan sát cấu trúc sâu của các tế bào và mô sống và cố định, đồng thời thu được các cấu trúc mặt phẳng Z nhiều lớp rõ ràng và sắc nét, tức là các lát cắt quang học, từ đó một cấu trúc rắn ba chiều của mẫu vật có thể được xây dựng. Kính hiển vi đồng tiêu sử dụng nguồn sáng laser được mở rộng để lấp đầy toàn bộ mặt phẳng tiêu cự phía sau của vật kính, sau đó đi qua hệ thống thấu kính của vật kính để hội tụ thành các điểm rất nhỏ trên mặt phẳng tiêu cự của mẫu vật. Tùy thuộc vào khẩu độ số của vật kính, kích thước của đường kính điểm chiếu sáng sáng là khoảng 0,25 ~ 0,8 μm và độ sâu khoảng 0,5 ~ 1,5 ừm. Kích thước của tiêu điểm được xác định bởi thiết kế kính hiển vi, bước sóng laser, đặc điểm của vật kính, cài đặt trạng thái của bộ phận quét và bản chất của mẫu vật. Kính hiển vi trường có phạm vi chiếu sáng lớn và độ sâu chiếu sáng, trong khi kính hiển vi đồng tiêu tập trung chiếu sáng vào một tiêu điểm duy nhất trên mặt phẳng tiêu điểm. Ưu điểm cơ bản nhất của kính hiển vi đồng tiêu là khả năng tạo ra các phần quang học mịn của mẫu vật huỳnh quang dày (lên đến 50 μm hoặc hơn), với độ dày phần khoảng 0,5 đến 1,5 μm. Một loạt các hình ảnh quang học có thể thu được bằng cách di chuyển mẫu lên và xuống bằng động cơ bước trục Z của kính hiển vi. Việc thu thập thông tin hình ảnh được kiểm soát trong mặt phẳng đầu tiên và không bị cản trở bởi các tín hiệu phát ra từ các vị trí khác trên mẫu vật. Sau khi loại bỏ ảnh hưởng của huỳnh quang nền và tăng tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu, độ tương phản và độ phân giải của hình ảnh đồng tiêu được cải thiện đáng kể so với hình ảnh huỳnh quang được chiếu sáng trường thông thường. Trong nhiều mẫu vật, nhiều thành phần cấu trúc phức tạp đan xen vào nhau để tạo thành các hệ thống phức tạp, nhưng một khi có thể thu được đủ các phần quang học, chúng ta có thể tái tạo lại chúng theo ba chiều bằng phần mềm. Phương pháp thí nghiệm này đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học để làm sáng tỏ mối quan hệ cấu trúc và chức năng phức tạp giữa các tế bào hoặc mô.
