Cách chọn kính hiển vi huỳnh quang phù hợp
Kính hiển vi huỳnh quang là thiết bị chụp ảnh hiển vi tiêu chuẩn trong các phòng thí nghiệm và khoa bệnh lý, sử dụng các đặc tính huỳnh quang để quan sát và chụp ảnh. Nó được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực khác nhau như sinh học tế bào, sinh học thần kinh, thực vật học, vi sinh, bệnh lý, di truyền, v.v. Hình ảnh huỳnh quang có ưu điểm là độ nhạy và độ đặc hiệu cao nên rất phù hợp để quan sát sự phân bố của các protein, bào quan cụ thể, v.v. trong các mô và tế bào, nghiên cứu sự đồng địa hóa và tương tác, theo dõi các quá trình động học của sự sống như sự thay đổi nồng độ ion, v.v.
Lựa chọn kính hiển vi
Kính hiển vi huỳnh quang chủ yếu được chia thành ba loại: kính hiển vi huỳnh quang thẳng đứng (thích hợp để cắt lát), kính hiển vi huỳnh quang đảo ngược (thích hợp cho tế bào sống và cả để cắt lát) và kính hiển vi huỳnh quang nổi (thích hợp cho các mẫu vật lớn hơn, chẳng hạn như thực vật, cá ngựa vằn (người lớn/ phôi thai), medaka, nội tạng của chuột/chuột, v.v.).
Lựa chọn khối lọc huỳnh quang
Việc lựa chọn khối lọc không chỉ cần xem xét bước sóng kích thích và phát xạ của đầu dò huỳnh quang mà còn phải xem xét liệu có kích thích không đặc hiệu hay không và liệu có nhiễu xuyên âm màu đối với các mẫu được dán nhãn nhiều màu hay không. Trong thử nghiệm, chúng tôi sẽ chọn bước sóng gần đỉnh kích thích nhất có thể để kích thích và phạm vi thu phải bao gồm cả đỉnh phát xạ. Đỉnh kích thích của Alexa Fluor 488 là 500nm và có thể chọn bộ lọc kích thích 480/40 trong kính hiển vi huỳnh quang. Các khối lọc huỳnh quang thường được sử dụng trong kính hiển vi huỳnh quang có thể được chia thành hai loại: đường truyền dài (LP) và đường truyền dải (BP), cũng cần được lựa chọn theo nhu cầu.
kính hiển vi đồng tiêu
Trong quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang truyền thống, do sự chồng chéo của các chất đánh dấu huỳnh quang và cấu trúc huỳnh quang tự phát nên chúng liên kết chặt chẽ với nhau. Tuy nhiên, vật kính của kính hiển vi huỳnh quang rơi truyền thống không chỉ thu thập ánh sáng từ mặt phẳng tiêu cự mà còn tán xạ ánh sáng lên xuống mặt phẳng tiêu điểm, dẫn đến giảm đáng kể độ phân giải và độ tương phản của hình ảnh.
Chụp ảnh đồng tiêu chỉ phát hiện ánh sáng phản xạ từ mặt phẳng tự lấy nét, nhờ đó giải quyết được vấn đề trên. Nguồn sáng tạo thành một điểm nhỏ và mịn trên mặt phẳng tiêu điểm thông qua một lỗ kim, và ánh sáng phát ra từ mặt phẳng tiêu điểm được thu qua thấu kính vật kính. Phần lớn huỳnh quang phát ra từ các điểm phía trên hoặc phía dưới mặt phẳng tiêu cự của thấu kính vật kính không thể hội tụ về lỗ kim. Chỉ huỳnh quang nằm trong mặt phẳng tiêu cự và một phần nhỏ huỳnh quang mất tập trung mới có thể đi qua lỗ kim, trong khi chùm ánh sáng bên ngoài mặt phẳng tiêu điểm hội tụ ở phía trước hoặc phía sau tấm lỗ kim và bị chặn đi vào máy dò qua lỗ kim. Hình ảnh được phát hiện là từ mặt phẳng tiêu cự nên chất lượng hình ảnh cuối cùng được cải thiện rất nhiều.
Do những ưu điểm và tính thực tiễn khác nhau của kính hiển vi đồng tiêu quét laser, nó hiện là trợ lý thí nghiệm không thể thiếu trong các lĩnh vực nghiên cứu tế bào, thực vật học và sinh học tế bào có độ chính xác cao. Đồng thời, tại các trung tâm nghiên cứu khoa học trong tương lai, nó sẽ là công cụ nghiên cứu cơ bản và cốt lõi nhất.
