Nguyên lý kính hiển vi huỳnh quang và đặc điểm cấu trúc
Kính hiển vi huỳnh quang là việc sử dụng hiệu suất phát quang cao của điểm, thông qua quá trình lọc của hệ màu để phát ra một bước sóng ánh sáng nhất định (như tia cực tím 3650 vào hoặc màu xanh tím 4200 vào) làm ánh sáng kích thích, sự kích thích vật liệu huỳnh quang trong mẫu vật phát ra nhiều màu huỳnh quang khác nhau, sau đó được phóng đại qua vật kính và thị kính để quan sát. Bằng cách này, trong nền tương phản mạnh, ngay cả khi huỳnh quang rất yếu cũng dễ dàng xác định, độ nhạy cao, chủ yếu được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc, chức năng và thành phần hóa học của tế bào. Cấu trúc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang bao gồm một kính hiển vi quang học thông thường cộng với một số phụ kiện (như nguồn sáng huỳnh quang, bộ lọc kích thích, bộ tách chùm tia hai màu và bộ lọc chặn, v.v.). Nguồn sáng huỳnh quang - thường sử dụng đèn thủy ngân siêu cao áp (50-200W), có thể phát ra nhiều bước sóng ánh sáng khác nhau, nhưng mỗi vật liệu huỳnh quang có bước sóng kích thích huỳnh quang mạnh nhất, do đó cần phải thêm bộ lọc kích thích (nói chung bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, xanh lam và xanh lục), sao cho chỉ có một bước sóng ánh sáng kích thích nhất định xuyên qua sự chiếu xạ của mẫu vật, trong khi ánh sáng còn lại bị hấp thụ. Vì vậy, cần phải thêm một bộ lọc kích thích (thường là các bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, xanh lam và xanh lục), sao cho chỉ một bước sóng ánh sáng kích thích nhất định đi qua mẫu vật, trong khi các ánh sáng khác bị hấp thụ. Khi mỗi chất được chiếu xạ bằng ánh sáng kích thích, nó sẽ phát ra huỳnh quang nhìn thấy có bước sóng dài hơn bước sóng của ánh sáng được chiếu xạ trong một thời gian rất ngắn. Huỳnh quang có tính đặc hiệu, thường yếu hơn ánh sáng kích thích, để có thể quan sát được huỳnh quang cụ thể, phải chọn vật kính phía sau cần thêm tính năng chặn (hoặc triệt tiêu) để sử dụng.
Sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi thông thường
1. Phương pháp chiếu sáng thường rơi, nghĩa là nguồn sáng được chiếu lên mẫu qua thấu kính vật kính;
2. Nguồn sáng là tia cực tím, có bước sóng ngắn hơn và độ phân giải cao hơn kính hiển vi thông thường;
3. Có hai bộ lọc đặc biệt, một bộ lọc phía trước nguồn sáng dùng để lọc ánh sáng khả kiến, và một bộ lọc giữa thị kính và thấu kính vật kính dùng để lọc tia cực tím để bảo vệ mắt người.
Kính hiển vi huỳnh quang cũng là một loại kính hiển vi quang học, điểm khác biệt chính là bước sóng kích thích của hai loại này là khác nhau. Điều này xác định cấu trúc của kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường cũng như việc sử dụng các phương pháp khác nhau.
Kính hiển vi huỳnh quang là công cụ cơ bản cho hóa học tế bào miễn dịch huỳnh quang. Nó bao gồm nguồn sáng, hệ thống tấm lọc và hệ thống quang học và các thành phần chính khác. Nó sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định để kích thích mẫu vật phát ra huỳnh quang, được phóng đại qua vật kính và hệ thống thị kính để quan sát hình ảnh huỳnh quang của mẫu vật.
