Sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường
Kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường khác nhau, kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường là khác nhau, không phải thông qua sự chiếu sáng của nguồn sáng thông thường để quan sát mẫu vật mà là sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định (thường là tia cực tím, xanh tím) kích thích mẫu vật dưới kính hiển vi bên trong vật liệu huỳnh quang để nó phát ra ánh sáng huỳnh quang, do đó, vai trò của kính hiển vi huỳnh quang đối với nguồn sáng không phải là ánh sáng trực tiếp mà là một loại kích thích mẫu vật phát huỳnh quang bên trong. Nguồn của kính hiển vi huỳnh quang không phải là nguồn chiếu sáng trực tiếp mà là nguồn năng lượng để kích thích chất huỳnh quang bên trong mẫu vật. Sở dĩ chúng ta quan sát được mẫu vật không phải do sự chiếu sáng của nguồn sáng mà là hiện tượng huỳnh quang do chất huỳnh quang có trong mẫu vật biểu hiện sau khi hấp thụ năng lượng ánh sáng kích thích. Có thể thấy rằng đặc điểm của kính hiển vi huỳnh quang chủ yếu là nguồn sáng của nó có thể cung cấp một số lượng lớn ánh sáng kích thích ở dải bước sóng cụ thể, do đó các chất huỳnh quang trong mẫu được kiểm tra có thể thu được cường độ ánh sáng kích thích cần thiết. Đồng thời, kính hiển vi huỳnh quang phải có hệ thống lọc tương ứng. Kính hiển vi huỳnh quang là công cụ cơ bản cho **hóa mô huỳnh quang. Nó bao gồm nguồn ánh sáng áp suất cực cao, hệ thống lọc (bao gồm tấm lọc kích thích và triệt tiêu), hệ thống quang học và hệ thống chụp ảnh và các thành phần chính khác, là việc sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định để kích thích mẫu vật phát ra huỳnh quang.
1. phương pháp kích thích huỳnh quang: theo phạm vi bước sóng của ánh sáng được chia thành phương pháp kích thích UV (sử dụng tia cực tím) và phương pháp kích thích BV (sử dụng ánh sáng tím xanh), hai loại phương pháp kích thích UV ngắn hơn 400nm gần tia cực tím đối với sự kích thích. Không có ánh sáng kích thích nhìn thấy được trong phương pháp này, do đó huỳnh quang quan sát được cho thấy huỳnh quang vốn có của thuốc nhuộm và dễ dàng phân biệt huỳnh quang cụ thể trên mẫu vật với sự tự phát huỳnh quang của mô nền.
2. Phương pháp kích thích BV: Phương pháp tập trung vào bước sóng 404nm, 434nm từ tia cực tím đến ánh sáng xanh để kích thích. Phương pháp này sử dụng ánh sáng xanh để chiếu xạ mẫu vật, do đó bộ lọc cắt của hệ thống quan sát huỳnh quang phải sử dụng bộ lọc có thể chặn hoàn toàn ánh sáng xanh và vượt qua hoàn toàn huỳnh quang xanh lục và vàng mong muốn. Sắc tố huỳnh quang cho phương pháp kháng thể huỳnh quang. Do bước sóng hấp thụ tối đa của ánh sáng kích thích và bước sóng phát xạ tối đa của huỳnh quang gần nhau nên các bộ lọc được sử dụng trong phương pháp kích thích BV phải là các bộ lọc cắt sắc nét. Phương pháp này sử dụng ánh sáng xanh làm ánh sáng kích thích nên hiệu suất hấp thụ của fluorochrome cao hơn và có thể thu được hình ảnh sáng hơn. Nhược điểm là không thể nhìn thấy huỳnh quang dưới 500 nm và trên 500 nm toàn bộ hình ảnh có màu vàng. Trong phương pháp kháng thể huỳnh quang, hầu hết độ đặc hiệu được đánh giá bằng màu sắc duy nhất của fluorochrome, do đó, nhược điểm của phương pháp kích thích BV được mô tả ở trên có xu hướng ảnh hưởng cực kỳ lớn khi thảo luận về độ đặc hiệu tinh tế.
