Kiến thức thực tế về kính hiển vi huỳnh quang đồng tiêu
Nguyên lý cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang đồng tiêu: Sử dụng nguồn sáng điểm chiếu sáng mẫu vật để tạo thành một điểm sáng nhỏ, rõ nét trên mặt phẳng tiêu điểm. Huỳnh quang phát ra từ điểm sau khi được chiếu sáng được thấu kính thu lại và quay trở lại gương lưỡng sắc dọc theo đường ánh sáng chiếu sáng ban đầu. tạo thành một bộ tách chùm. Máy quang phổ gửi huỳnh quang trực tiếp đến máy dò. Có một lỗ kim ở phía trước nguồn sáng và máy dò, chúng lần lượt được gọi là lỗ kim chiếu sáng và lỗ kim phát hiện. Kích thước hình học của cả hai đều nhất quán, khoảng 100-200nm; so với điểm sáng trên mặt phẳng tiêu cự, cả hai đều liên hợp, nghĩa là điểm sáng đi qua một loạt thấu kính và cuối cùng có thể tập trung vào lỗ kim chiếu sáng và lỗ kim phát hiện cùng một lúc. Bằng cách này, ánh sáng từ mặt phẳng tiêu điểm có thể tập trung trong phạm vi của lỗ phát hiện, trong khi ánh sáng tán xạ từ phía trên hoặc bên dưới mặt phẳng tiêu điểm bị chặn bên ngoài lỗ phát hiện và không thể chụp được. Mẫu được quét từng điểm bằng tia laser và ống nhân quang phía sau lỗ kim phát hiện cũng thu được hình ảnh đồng tiêu của từng điểm sáng tương ứng, được chuyển đổi thành tín hiệu số và truyền đến máy tính, và cuối cùng được tổng hợp trên màn thành ảnh rõ nét, tiêu điểm của toàn bộ mặt phẳng tiêu điểm. .
Mỗi hình ảnh mặt phẳng tiêu cự thực sự là một mặt cắt quang học của mẫu vật. Mặt cắt quang học này luôn có độ dày nhất định và còn được gọi là mặt cắt mỏng quang học. Vì cường độ ánh sáng ở tiêu điểm lớn hơn nhiều so với cường độ ánh sáng ở điểm không tiêu điểm và ánh sáng mặt phẳng không tiêu điểm được lọc bởi lỗ kim, nên độ sâu trường ảnh của hệ thống tiêu điểm xấp xỉ bằng 0. Quét dọc theo hướng trục Z có thể thực hiện chụp cắt lớp quang học, tạo thành hình ảnh mong muốn Quan sát phần quang học hai chiều tại điểm lấy nét của mẫu. Bằng cách kết hợp quét mặt phẳng XY (mặt phẳng tiêu cự) với quét trục Z (trục quang), bằng cách tích lũy mức độ liên tục của hình ảnh hai chiều và xử lý chúng bằng phần mềm máy tính chuyên dụng, có thể thu được hình ảnh ba chiều của mẫu.
Nghĩa là, lỗ kim phát hiện và lỗ kim nguồn sáng luôn tập trung vào cùng một điểm, do đó huỳnh quang bị kích thích bên ngoài mặt phẳng tiêu điểm không thể đi vào lỗ kim phát hiện.
Biểu hiện đơn giản về nguyên lý làm việc của tiêu điểm laser là nó sử dụng tia laser làm nguồn sáng. Trên cơ sở hình ảnh kính hiển vi huỳnh quang truyền thống, một thiết bị quét laser và thiết bị lấy nét liên hợp được thêm vào và hệ thống được điều khiển bởi máy tính để thu thập và xử lý hình ảnh kỹ thuật số.
