Nâng cao lợi ích của kính hiển vi quét laser đa photon
Kính hiển vi đa photon quét laser là một cải tiến lớn so với kính hiển vi quang học. Nó có thể quan sát cấu trúc sâu của tế bào sống, tế bào và mô cố định, đồng thời có thể thu được các cấu trúc mặt phẳng Z nhiều lớp rõ ràng và sắc nét, tức là các phần quang học, từ đó nó có thể xây dựng Cấu trúc rắn ba chiều của mẫu vật. Kính hiển vi đồng tiêu sử dụng nguồn sáng laser, sau khi mở rộng, sẽ lấp đầy toàn bộ mặt phẳng tiêu cự phía sau của vật kính, sau đó đi qua hệ thống thấu kính của vật kính để hội tụ thành một điểm rất nhỏ trên mặt phẳng tiêu cự của mẫu vật. Tùy thuộc vào khẩu độ số của vật kính, đường kính của điểm chiếu sáng sáng nhất là khoảng 0,25 ~ 0,8μm và độ sâu khoảng 0,5 ~ 1,5μm . Kích thước của điểm tiêu điểm phụ thuộc vào thiết kế kính hiển vi, bước sóng laser, đặc điểm vật kính, cài đặt trạng thái thiết bị quét và đặc tính của mẫu vật. Phạm vi chiếu sáng và độ sâu chiếu sáng của kính hiển vi trường lớn, trong khi độ chiếu sáng của kính hiển vi đồng tiêu tập trung vào tiêu điểm chính xác trên mặt phẳng tiêu cự. Ưu điểm cơ bản nhất của kính hiển vi đồng tiêu là nó có thể thực hiện phân cắt quang học tốt các mẫu vật huỳnh quang dày (có thể đạt tới 50 μm trở lên) và độ dày của các lát cắt là khoảng 0,5 đến 1,5 μm. Có thể thu được hình ảnh mặt cắt quang học nối tiếp bằng cách di chuyển mẫu lên xuống bằng động cơ bước trục Z tinh vi của kính hiển vi. Việc thu thập thông tin hình ảnh được kiểm soát trong một mặt phẳng chính xác mà không bị nhiễu bởi các tín hiệu phát ra từ các vị trí khác trên mẫu vật. Sau khi loại bỏ ảnh hưởng của huỳnh quang nền và tăng tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu, độ tương phản và độ phân giải của hình ảnh đồng tiêu được cải thiện đáng kể so với hình ảnh huỳnh quang được chiếu sáng trường truyền thống. Trong nhiều mẫu vật, nhiều thành phần cấu trúc phức tạp được đan xen vào nhau để tạo thành các hệ thống phức tạp, nhưng khi thu thập đủ các phần quang học, chúng ta có thể tái tạo lại chúng theo ba chiều thông qua phần mềm. Phương pháp thí nghiệm này đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học để làm sáng tỏ mối quan hệ cấu trúc và chức năng phức tạp giữa các tế bào hoặc mô.
