Tại sao độ phóng đại của thấu kính dầu lớn hơn độ phóng đại của vật kính thông thường?
Lý do cần cố định vi khuẩn trước khi nhuộm trong thí nghiệm vi sinh:
1: Làm chết tế bào, dễ bị nhuộm màu.
2: Làm cho vi khuẩn bám vào phiến kính và không dễ bị nước rửa trôi.
Khi sửa nên làm khô từ từ. Nếu bạn thực sự muốn tăng tốc, bạn có thể làm khô nó vài lần ở khoảng cách trên ngọn lửa đèn cồn. Đừng để phiến kính nóng lên, nếu không nó có thể phá hủy dạng sống của vi khuẩn.
Nhuộm gram và quan sát vi khuẩn dưới kính hiển vi
1. Nguyên lý thí nghiệm
Nguyên tắc nhuộm Gram: Vi khuẩn phản ứng khác nhau với nhuộm Gram do thành phần và cấu trúc thành tế bào của chúng. Thành tế bào của vi khuẩn Gram dương chủ yếu là nút mạng lưới do peptidoglycan tạo thành. Khi được xử lý bằng ethanol, kích thước lỗ của cấu trúc mạng trở nên nhỏ hơn do mất nước và tính thấm giảm, do đó phức hợp của tinh thể tím-iodine Chất này không dễ bị rửa giải và bị giữ lại trong tế bào, và màu xanh- màu tím của chất nhuộm màu chính vẫn được giữ lại sau quá trình khử màu và phản màu. Lớp peptidoglycan của thành tế bào vi khuẩn Gram âm mỏng, hàm lượng lipid cao nên khi xử lý khử màu, lipid được hòa tan bởi ethanol (hoặc acetone), tính thấm của thành tế bào tăng lên, do đó rằng phức hợp của tinh thể tím-iodine Nó dễ dàng được rửa giải hơn và sau khi nhuộm bằng thuốc nhuộm ngược, các tế bào được nhuộm bằng màu đỏ của thuốc nhuộm. Nguyên lý chụp ảnh của kính hiển vi: Kính hiển vi quang học thông thường hiện đại sử dụng hai hệ thấu kính gồm thị kính và vật kính để phóng đại ảnh nên thường được gọi là kính hiển vi phức hợp. Trong hệ thống quang học của kính hiển vi, hiệu suất của vật kính là quan trọng nhất và độ phóng đại của thấu kính dầu là lớn nhất, đây là điều quan trọng nhất đối với nghiên cứu vi sinh vật. Mục đích chính của việc thêm dầu ngâm giữa phiến kính và thấu kính là để tăng độ sáng của vùng chiếu sáng và tăng độ phân giải của kính hiển vi. Dầu được sử dụng thay vì không khí làm môi trường truyền ánh sáng để giảm khúc xạ hoặc phản xạ toàn phần của ánh sáng và làm cho hình ảnh quan sát được rõ hơn.
2. Thiết bị thí nghiệm
1. Thuộc địa:
Escherichia coli nuôi cấy nghiêng thạch dinh dưỡng 24h,
Staphylococcus aureus khoảng 24h nuôi cấy nghiêng trên thạch dinh dưỡng, Bacillus subtilis 12-18h nuôi cấy nghiêng trên thạch dinh dưỡng.
2. Dung dịch hoặc thuốc thử:
Nước cất, dung dịch iốt, dung dịch nhuộm pha lê tím, cồn 95 phần trăm, dung dịch nhuộm safranin, dầu tuyết tùng. 3. Nhạc cụ:
Kính hiển vi, lam kính, vòng cấy, đèn cồn, nhíp, khăn giấy.
3. Các bước thực nghiệm
a:
1. Bôi nhọ
Lấy phiến kính ra, đốt cháy phiến kính, đốt hết cồn trên phiến kính và khử trùng, nhỏ một giọt nước cất vào giữa, dùng vòng cấy nhẹ nhàng lấy một lượng nhỏ vi khuẩn trên môi trường nghiêng của xét nghiệm. ống, Trong toàn bộ quá trình, miệng ống nghiệm phải ở phía trên đèn cồn và tốc độ phải nhanh để tránh làm nhiễm bẩn môi trường nuôi cấy. Sau đó bôi những giọt nước nhỏ lên lam kính theo chuyển động tròn, dừng lại khi những giọt nước đục, đợi khô và cố định.
2. Nhuộm sơ cấp
Nhỏ tinh thể tím (thích hợp khi chỉ phủ màng vi khuẩn) lên khuẩn lạc, nhuộm trong 1-2 phút, đổ dung dịch nhuộm đi và rửa bằng nước sạch từ trên cùng của phiến kính cho đến khi dịch rửa giải không màu, và đặt vết lên lam kính. Lắc nước trên các lát.
3. Thuốc cầm màu
Thêm từng giọt dung dịch iốt để rửa sạch nước còn sót lại, đậy nắp trong khoảng 1 phút và rửa bằng nước.
4. Khử màu
Lắc nước trên phiến kính, nghiêng phiến kính và thêm cồn 95 phần trăm để khử màu dưới nền trắng, cho đến khi cồn chảy ra không có màu xanh lam, ngay lập tức rửa sạch cồn bằng nước và đặt phiến kính Lắc tắt nước trên các lát.
5. Chống nhuộm màu
Chống nhuộm bằng dung dịch safranin trong khoảng 1-2 phút, rửa bằng nước, sau đó thấm khô bằng giấy thấm
6. Kiểm tra bằng kính hiển vi:
Tìm khuẩn lạc cần quan sát dưới thấu kính có độ phóng đại thấp (tiếp tục di chuyển phiến kính, nếu thấy bóng đỏ thì dừng ngay, điều chỉnh độ phóng đại, nếu không phải khuẩn lạc thì tiếp tục tìm), nâng ống kính lên, và sau đó chuyển sang gương dầu. Thêm một giọt dầu tuyết tùng vào khu vực mẫu và cẩn thận hạ thấp ống thấu kính bằng bộ điều chỉnh thô sao cho thấu kính dầu được ngâm trong dầu và gần như chạm vào mẫu vật. Nâng tụ quang lên vị trí cao nhất và mở hết khẩu độ, sử dụng bộ điều chỉnh thô để nâng từ từ vành thấu kính cho đến khi hình ảnh đối tượng xuất hiện trong trường nhìn và sử dụng bộ điều chỉnh tinh để làm rõ và đúng nét.
