Loại kính hiển vi nào được sử dụng để xem hình dạng của tế bào vi sinh vật
Một thuật ngữ chung cho tất cả các sinh vật nhỏ bé mà các cá nhân khó quan sát bằng mắt thường. Vi sinh vật bao gồm vi khuẩn, vi rút, nấm và một số loại tảo. (Tuy nhiên, một số vi sinh vật có thể nhìn thấy bằng mắt thường, chẳng hạn như nấm thuộc họ nấm, Ganoderma lucidum, v.v.) Virus là một loại "sinh vật không tế bào" bao gồm một số thành phần như axit nucleic và protein, nhưng chúng sự sống còn phải phụ thuộc vào các tế bào sống. Theo các môi trường khác nhau tồn tại, chúng có thể được chia thành vi sinh vật nhân sơ, vi sinh vật không gian, vi sinh vật nấm, vi sinh vật nấm men, vi sinh vật biển, v.v.
Vai trò và tác hại của vi sinh vật:
Một trong những tác động quan trọng nhất của vi sinh vật đối với con người là sự phổ biến của các bệnh truyền nhiễm. 50 phần trăm các bệnh của con người là do virus gây ra. Lịch sử vi khuẩn gây bệnh cho con người là lịch sử đấu tranh không ngừng của loài người với chúng. Con người đã đạt được nhiều tiến bộ trong việc phòng ngừa và điều trị bệnh, nhưng các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn mới và tái xuất hiện vẫn tiếp tục xảy ra, chẳng hạn như một số lượng lớn các bệnh do virus thiếu thuốc điều trị hiệu quả. Cơ chế gây bệnh của một số bệnh chưa rõ ràng. Việc lạm dụng một số lượng lớn các loại kháng sinh phổ rộng đã gây ra áp lực chọn lọc mạnh mẽ, khiến nhiều chủng vi khuẩn biến đổi, dẫn đến xuất hiện tình trạng kháng thuốc, sức khỏe con người bị đe dọa bởi những mối đe dọa mới. Một số virus được phân đoạn có thể biến đổi thông qua tái tổ hợp hoặc sắp xếp lại. Ví dụ điển hình nhất là virus cúm.
Sau khi biết định nghĩa cụ thể về vi sinh vật, người thí nghiệm nên sử dụng loại kính hiển vi nào khi nghiên cứu vi sinh vật để xem, và kính hiển vi nào có thể được sử dụng để nhìn rõ hơn cũng như quan sát và phân tích các dạng vi sinh vật phổ biến.
Phát minh ra kính hiển vi là có thể nhìn thấy những vật thể đang cười mà mắt thường không thể nhìn thấy. Kích thước của vi sinh vật rất nhỏ, vì vậy chúng phải được phóng đại và quan sát dưới sự hỗ trợ của kính hiển vi. Ngoài ra, có rất nhiều loại vi sinh vật nên về cơ bản hầu hết các loại kính hiển vi quang học đều có thể quan sát được vi sinh vật, câu hỏi tiếp theo là nên sử dụng loại kính hiển vi nào để quan sát và phân tích vi sinh vật. Kính hiển vi phổ biến để quan sát hình thái vi sinh vật bao gồm kính hiển vi sinh học, kính hiển vi tương phản pha, kính hiển vi đảo ngược, kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi đồng tiêu. Kính hiển vi và như vậy.
Sau đây mô tả các kính hiển vi khác nhau được sử dụng để quan sát vi sinh vật:
1. Kính hiển vi ánh sáng thông thường
Ánh sáng tự nhiên hoặc ánh sáng được sử dụng làm nguồn sáng và bước sóng của nó là khoảng {{0}}.4 μm. Độ phân giải của kính hiển vi bằng một nửa bước sóng, nghĩa là 0.2 μm và hình ảnh nhỏ nhất có thể nhìn thấy bằng mắt thường là 0.2 mm. Do đó, sử dụng gương (ngâm) trong dầu để phóng đại 1000 lần có thể phóng to các hạt 0,2μm thành 0,2 mm có thể nhìn thấy bằng mắt thường. Kính hiển vi quang học thông thường có thể được sử dụng để quan sát vi khuẩn, xạ khuẩn và nấm.
2. Kính hiển vi trường tối thường được sử dụng để quan sát hình thái và chuyển động của vi sinh vật không nhuộm màu. Sau khi thiết bị ngưng tụ trường tối được lắp đặt trong kính hiển vi thông thường, ánh sáng không thể xuyên qua trực tiếp từ giữa và trường nhìn tối. Khi bệnh phẩm nhận được ánh sáng xiên từ mép của tụ quang, nó có thể bị tán xạ nên có thể quan sát được các vi sinh vật sáng trong nền trường tối như vi khuẩn hoặc xoắn khuẩn.
3. Kính hiển vi tương phản pha Kính hiển vi tương phản pha sử dụng hiệu ứng ánh sáng của tấm lệch pha để thay đổi pha sáng và biên độ của ánh sáng trực tiếp, đồng thời chuyển đổi sự khác biệt của pha sáng thành sự khác biệt về cường độ ánh sáng. Dưới kính hiển vi tương phản pha, khi ánh sáng đi qua mẫu vật không bắt màu, sự khác biệt về pha sáng là do mật độ của các phần khác nhau của mẫu vật không đồng nhất, có thể quan sát được hình thái, cấu trúc bên trong và phương thức vận động của vi sinh vật.
4. Kính hiển vi huỳnh quang Kính hiển vi huỳnh quang về cơ bản giống như kính hiển vi quang học thông thường, sự khác biệt chính là nguồn sáng, bộ lọc và tụ điện. Hiện nay, hầu hết trong số họ sử dụng các thiết bị ánh sáng epi và đèn thủy ngân cao áp thường được sử dụng làm nguồn sáng, có thể phát ra tia cực tím hoặc xanh tím. Có hai loại bộ lọc: bộ lọc kích thích và bộ lọc hấp thụ. Ngoài các tụ quang trường sáng nói chung, các tụ quang trường tối cũng có thể được sử dụng trong kính hiển vi huỳnh quang sử dụng ánh sáng xanh lam để tăng cường độ tương phản giữa huỳnh quang và nền. Phương pháp này có thể áp dụng để phát hiện hoặc xác định vi khuẩn được nhuộm bằng sắc tố huỳnh quang hoặc kết hợp với kháng thể huỳnh quang.
5. Kính hiển vi điện tử sử dụng dòng điện tử làm nguồn sáng. So với ánh sáng khả kiến, bước sóng khác nhau hàng chục nghìn lần, giúp cải thiện đáng kể độ phân giải. Cuộn dây từ được sử dụng làm hệ thống khuếch đại quang học và độ phóng đại có thể đạt tới hàng chục nghìn hoặc hàng trăm nghìn lần. Nó thường được sử dụng trong các hạt virus. và quan sát cơ sở hạ tầng vi khuẩn.
Quan sát tiêu bản vi sinh vật không nhuộm màu:
Các mẫu vật không nhuộm thường có thể được sử dụng để quan sát hình thái, sức mạnh và sự di chuyển của vi khuẩn. Vi khuẩn không màu và trong suốt khi không nhuộm màu, và được quan sát dưới kính hiển vi chủ yếu bằng sự khác biệt giữa chỉ số khúc xạ của vi khuẩn và môi trường xung quanh. Vi khuẩn có roi di chuyển mạnh mẽ, trong khi vi khuẩn không có roi thể hiện chuyển động Brown không đều. Các vi khuẩn khả thi như Treponema pallidum, Leptospira và Campylobacter có hình dạng và kiểu di chuyển đặc biệt, có ý nghĩa chẩn đoán. Các phương pháp thường được sử dụng là phương pháp giảm áp suất, phương pháp thả mặt dây chuyền và phương pháp mao dẫn.
1. Phương pháp thả treo Bôi vaseline xung quanh lỗ lõm của phiến kính lõm sạch, lấy một vòng huyền phù vi khuẩn bằng que cấy và đặt vào giữa nắp kính, sau đó căn chỉnh lỗ lõm của phiến kính lõm với giọt ở giữa kính đậy và Đặt nắp vào, sau đó lật nhanh, ấn nhẹ vào nắp trượt để nó dính chặt vào vaseline trên mép lỗ lõm, sau đó quan sát dưới công suất cao kính hiển vi (hoặc trường tối).
2. Lấy một vòng huyền phù vi khuẩn bằng que cấy và đặt vào giữa phiến kính sạch bằng phương pháp giảm áp, và nhẹ nhàng đậy huyền phù vi khuẩn bằng một tấm kính đậy, cẩn thận để tránh tạo bọt khí và ngăn ngừa đình chỉ vi khuẩn từ tràn. Quan sát trường sáng (hoặc trường tối) dưới ống kính công suất cao.
3. Phương pháp mao quản chủ yếu được sử dụng để kiểm tra động học của vi khuẩn kỵ khí. Thường chọn chiều dài 60~70mm. Sau khi hút huyền phù vi khuẩn kỵ khí qua một mao quản có lỗ mở 0.5-1.0 mm, bịt kín hai đầu của mao quản bằng ngọn lửa. Mao quản được cố định trên phiến kính bằng giấy nhựa và được quan sát dưới thấu kính công suất cao trong trường tối.
Quan sát tiêu bản vi khuẩn đã nhuộm màu bằng kính hiển vi:
Sau khi tiêu bản vi khuẩn được nhuộm, do sự tương phản rõ rệt về màu sắc giữa vi khuẩn và môi trường xung quanh, các đặc điểm hình thái của vi khuẩn (như kích thước, hình dạng, cách sắp xếp, v.v.) của vi khuẩn và một số cấu trúc đặc biệt có thể được xác định. quan sát rõ ràng dưới kính hiển vi quang học thông thường (chẳng hạn như nang, roi, bào tử, v.v.), và vi khuẩn có thể được phân loại và xác định theo phản ứng nhuộm màu.
(1) Quy trình chung của nhuộm vi khuẩn Quy trình chung của nhuộm vi khuẩn là: bôi (làm khô)—cố định—nhuộm.
1. Phết tế bào Chuẩn bị máu, dịch tiết, chất bài tiết, dịch chọc dò và nuôi cấy chất lỏng, và phết màng mỏng trực tiếp lên lam kính; khám nghiệm tử thi hoặc các mô động vật bị nhiễm bệnh, bôi tổn thương bằng tăm bông để lấy mẫu. Để chuẩn bị các khuẩn lạc hoặc bãi cỏ vi khuẩn trên môi trường đặc, trước tiên sử dụng vòng cấy để lấy một vòng nước muối sinh lý và đặt vào giữa phiến kính, sau đó sử dụng vòng cấy vô trùng để lấy một lượng nhỏ dịch cấy và nghiền nhỏ. đều trong nước muối sinh lý rồi phết lên 1cm2 Bề mặt sơn lớn hay nhỏ, để khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng hoặc sấy khô từ từ ở khoảng cách xa.
2. Mục đích của việc cố định là tiêu diệt vi khuẩn, làm đông tụ cấu trúc và protein của vi khuẩn, tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình nhuộm màu; thúc đẩy vi khuẩn bám chặt vào phiến kính để tránh bị nước rửa trôi trong quá trình rửa; thay đổi tính thấm của vi khuẩn đối với thuốc nhuộm, có lợi cho cấu trúc của tế bào vi khuẩn nhuộm màu. Nó thường được cố định bằng cách đốt nóng bằng ngọn lửa, và vết bẩn khô nhanh chóng được đưa qua ngọn lửa 3 lần. Tốt hơn là không làm bỏng da trên mu bàn tay khi chạm vào cầu trượt.
3. Nhuộm Theo các mục đích kiểm tra khác nhau mà chọn các phương pháp nhuộm khác nhau để nhuộm. Khi nhuộm, thêm từng giọt dung dịch thuốc nhuộm để tăng độ che phủ.
4. Chất gắn màu Bất kỳ chất nào có thể tăng cường ái lực giữa thuốc nhuộm và vật nhuộm, cố định thuốc nhuộm trên vật nhuộm và gây ra sự thay đổi tính thấm của màng tế bào được gọi là chất gắn màu. Thường được sử dụng là phèn, axit tannic, muối kim loại và iốt, v.v., và đun nóng cũng được sử dụng để thúc đẩy màu sắc. Chất cầm màu có thể được sử dụng giữa nhuộm sơ cấp và nhuộm ngược, và cũng có thể được sử dụng sau khi cố định hoặc có trong chất cố định và nhuộm màu.
5. Khử màu Bất kỳ tác nhân hóa học nào có thể loại bỏ màu của vật nhuộm được gọi là chất khử màu. Ethanol, acetone, v.v. thường được sử dụng làm chất khử màu. Chất khử màu có thể phát hiện mức độ ổn định của sự kết hợp giữa vi khuẩn và thuốc nhuộm, có thể được sử dụng để nhuộm phân biệt.
6. Chống nhuộm Vi khuẩn hoặc cấu trúc của chúng đã bị mất màu thường được chống nhuộm bằng dung dịch chống nhuộm để dễ quan sát. Màu của dung dịch nhuộm màu khác với màu của dung dịch nhuộm chính để tạo thành độ tương phản rõ nét. Chất nhuộm màu không được quá mạnh để không che đi màu của vết nhuộm ban đầu.
