Những phương pháp chiếu sáng nào có sẵn cho kính hiển vi?
1. Chiếu sáng xuyên
Kính hiển vi sinh học hầu hết được dùng để quan sát các mẫu vật trong suốt và cần được chiếu sáng bằng ánh sáng truyền qua. Có hai phương pháp chiếu sáng
(1) Sau khi nguồn sáng chiếu sáng tới hạn đi qua tụ quang, nó được tạo ảnh trên mặt phẳng đối tượng, như trong Hình 5. Nếu bỏ qua sự mất năng lượng ánh sáng, độ sáng của ảnh nguồn sáng giống như ánh sáng chính nguồn sáng, vì vậy phương pháp này tương đương với việc đặt nguồn sáng trên mặt phẳng đối tượng. Rõ ràng, trong điều kiện chiếu sáng tới hạn, nếu độ sáng của bề mặt nguồn sáng không đồng đều hoặc hiển thị rõ ràng các cấu trúc nhỏ, chẳng hạn như dây tóc, v.v., thì hiệu ứng quan sát của kính hiển vi sẽ bị ảnh hưởng nghiêm trọng, đó là nhược điểm của chiếu sáng quan trọng. Biện pháp khắc phục là đặt tấm lọc màu trắng sữa, hấp thụ nhiệt phía trước nguồn sáng để độ chiếu sáng đều hơn, tránh làm hỏng vật cần kiểm tra do nguồn sáng chiếu xạ lâu ngày. Khi chiếu sáng bằng ánh sáng truyền qua, góc khẩu độ của chùm tia tạo ảnh của vật kính được xác định bởi góc khẩu độ của chùm tia vuông góc của gương tụ điện. Để tận dụng hết khẩu độ số của vật kính, thấu kính tụ điện phải có khẩu độ số giống hoặc lớn hơn một chút như vật kính.
(2) Chiếu sáng Kola Nhược điểm của việc chiếu sáng không đều trên bề mặt vật thể trong chiếu sáng tới hạn có thể được loại bỏ trong chiếu sáng Kola. Một thấu kính hội tụ phụ trợ 2 được thêm vào giữa nguồn sáng 1 và thấu kính hội tụ 5, như thể hiện trên Fig. 6 . Có thể thấy trường quan sát (mẫu vật) của vật kính được chiếu sáng đều do nguồn sáng không chiếu trực tiếp mà tụ quang phụ 2 (còn gọi là gương Kolar) được nguồn sáng chiếu sáng đều trên vật kính. mẫu vật 6 .
2. chiếu sáng epi
Khi quan sát các vật thể mờ đục, chẳng hạn như quan sát đĩa mài kim loại qua kính hiển vi kim loại, nó thường được chiếu sáng từ bên cạnh hoặc từ phía trên. Tại thời điểm này, không có kính che phủ trên bề mặt của vật thể được quan sát và hình ảnh của mẫu vật được tạo ra bởi ánh sáng phản xạ hoặc tán xạ đi vào vật kính. Như thể hiện trong Hình 7.
3. Phương pháp chiếu sáng để quan sát các hạt bằng trường tối
Các hạt siêu nhỏ có thể được quan sát bằng phương pháp trường tối. Cái gọi là các hạt siêu hiển vi dùng để chỉ những hạt cực nhỏ nhỏ hơn giới hạn độ phân giải của kính hiển vi. Nguyên tắc chiếu sáng trường tối là: không để ánh sáng chiếu sáng chính đi vào vật kính và chỉ ánh sáng tán xạ bởi các hạt mới có thể đi vào vật kính để chụp ảnh.
Do đó, ảnh của các hạt sáng được cho trên nền tối. Mặc dù nền của trường nhìn tối nhưng độ tương phản (contrast) rất tốt, có thể cải thiện độ phân giải.
Chiếu sáng trường tối có thể được chia thành một chiều và hai chiều
(1) Chiếu sáng trường tối một chiều Hình 8 là sơ đồ chiếu sáng trường tối một chiều. Từ hình vẽ có thể thấy rằng sau khi ánh sáng phát ra từ đèn chiếu sáng 2 được tấm mẫu mờ đục 1 phản xạ lại, ánh sáng chính không đi vào vật kính 3 và ánh sáng đi vào vật kính chủ yếu bị tán xạ bởi các hạt hoặc không đồng đều chi tiết. Rõ ràng, sự chiếu sáng trường tối một chiều này có hiệu quả để quan sát sự tồn tại và chuyển động của các hạt, nhưng nó không hiệu quả để tái tạo các chi tiết của vật thể, tức là có hiện tượng "méo hình".
(2) Chiếu sáng trường tối hai chiều Chiếu sáng trường tối hai chiều có thể loại bỏ khuyết tật biến dạng do một chiều gây ra. Ở phía trước của tụ quang ba thấu kính thông thường, hãy đặt một màng chắn hình khuyên, như trong Hình 9, để thực hiện chiếu sáng trường tối hai chiều. Chất lỏng được ngâm giữa mảnh cuối cùng của bộ ngưng tụ và vật kính, trong khi khoảng trống giữa kính che và vật kính khô. Do đó, chùm tia hình vòng đi qua tụ quang bị phản xạ toàn bộ trong kính che và không thể đi vào vật kính, tạo thành một vòng như trong hình. Chỉ có ánh sáng tán xạ bởi các hạt trên mẫu vật mới đi vào vật kính, tạo thành vùng chiếu sáng trường tối hai chiều.
