Các thành phần cấu trúc đặc biệt của kính hiển vi huỳnh quang là gì?
Khối lọc màu là một bộ phận quan trọng của kính hiển vi huỳnh quang và các thành phần cốt lõi của nó bao gồm bộ lọc rào cản thứ nhất cho ánh sáng kích thích, bộ lọc rào cản thứ hai cho ánh sáng phát xạ và gương tách chùm tia. Các mẫu bộ lọc màu và tên của các nhà sản xuất khác nhau thường không nhất quán.
1. Bộ lọc ánh sáng kích thích và bộ lọc ánh sáng phát xạ: Dựa trên đặc điểm của nguồn sáng và sắc tố huỳnh quang, ba loại kết hợp sau đây thường được chọn để cung cấp ánh sáng kích thích trong một phạm vi bước sóng nhất định và cho phép huỳnh quang được kích thích bởi mẫu đi qua và đến thị kính để chụp ảnh.
Kích thích tia cực tím: Bộ lọc ánh sáng kích thích có thể cho phép tia UV đi qua và chặn ánh sáng khả kiến trên 400nm đi qua. Bộ lọc ánh sáng phát xạ tương ứng cho phép ánh sáng xanh đi qua và ánh sáng trong trường nhìn có màu xanh lam, chẳng hạn như khi áp dụng cho nhuộm DAPI.
Kích thích ánh sáng xanh: Bộ lọc ánh sáng kích thích có thể cho phép ánh sáng xanh đi qua và chặn ánh sáng từ các bước sóng khác. Bộ lọc ánh sáng phát xạ tương ứng cho phép ánh sáng xanh đi qua, chẳng hạn như điểm đánh dấu nhuộm GFP.
Kích thích ánh sáng xanh: Bộ lọc ánh sáng kích thích cho phép ánh sáng xanh đi qua và chặn ánh sáng từ các bước sóng khác. Bộ lọc ánh sáng phát xạ tương ứng thường cho phép ánh sáng đỏ đi qua, chẳng hạn như nhuộm Rhodamine.
2. Bộ lọc màu bán trong suốt và bán phản chiếu: Chức năng của nó là chặn hoàn toàn ánh sáng kích thích đi qua và phản xạ nó; Và phát ra ánh sáng trong phạm vi bước sóng tương ứng. Mô hình của nó tương ứng với bộ lọc ánh sáng kích thích và bộ lọc ánh sáng phát xạ.
(2) Vật kính và thị kính
Có thể áp dụng nhiều vật kính khác nhau, nhưng tốt nhất nên chọn các thấu kính có thêm thang đo và giảm quang sai màu, vì khả năng tự phát huỳnh quang của chúng cực kỳ thấp và hiệu suất truyền ánh sáng (dải bước sóng) của chúng phù hợp cho huỳnh quang. Do độ sáng huỳnh quang của hình ảnh trong trường kính hiển vi tỷ lệ thuận với bình phương tỷ lệ khẩu độ của thấu kính vật kính và tỷ lệ nghịch với độ phóng đại của nó, để cải thiện độ sáng của hình ảnh huỳnh quang, nên sử dụng vật kính có tỷ lệ khẩu độ lớn hơn. Đặc biệt đối với các mẫu vật có độ huỳnh quang không đủ, nên sử dụng vật kính có tỷ lệ khẩu độ cao và độ truyền ánh sáng cao, kèm theo thị kính có độ phóng đại thấp nhất có thể.
(3) Các thiết bị quang học khác
Lớp phản chiếu của gương thường được phủ một lớp nhôm vì nhôm hấp thụ ít tia cực tím và ánh sáng khả kiến ở vùng màu xanh tím, phản chiếu trên 90% (trong khi bạc có độ phản xạ chỉ 70%). Nói chung, gương phẳng được sử dụng. Thấu kính hội tụ, được thiết kế và sản xuất đặc biệt cho kính hiển vi huỳnh quang, được làm bằng thủy tinh thạch anh hoặc thủy tinh khác truyền ánh sáng cực tím. Thiết bị ánh sáng rơi, ngoài chức năng của nguồn sáng truyền qua, còn phù hợp hơn để quan sát trực tiếp các mẫu vật mờ đục và bán trong suốt, chẳng hạn như tấm dày, màng lọc, khuẩn lạc vi khuẩn, nuôi cấy mô và các mẫu khác. Trong những năm gần đây, nhiều loại kính hiển vi huỳnh quang mới đã được phát triển bằng cách sử dụng thiết bị ánh sáng rơi, được gọi là kính hiển vi huỳnh quang ánh sáng rơi.
(4) Nguồn sáng
Ngày nay, đèn thủy ngân áp suất cao-50 hoặc 100W thường được sử dụng làm nguồn sáng. Trong quá trình hoạt động, xảy ra hiện tượng phóng điện giữa hai điện cực khiến thủy ngân bay hơi và áp suất bên trong quả cầu tăng nhanh (quá trình này thường mất khoảng 5-15 phút). Trong quá trình này, lượng tử ánh sáng được phát ra và bước sóng của ánh sáng giải phóng đủ để kích thích các chất huỳnh quang khác nhau. Vì vậy, nó được sử dụng rộng rãi trong kính hiển vi huỳnh quang.
Tuổi thọ của đèn thủy ngân tương đối ngắn, thường là 200 giờ. Để giải quyết hạn chế về tuổi thọ sử dụng này, trong những năm gần đây, loại nguồn sáng huỳnh quang X{2}}Cite mới đã được sử dụng rộng rãi với tuổi thọ bóng đèn siêu dài là 2000 giờ và khả năng sử dụng linh hoạt - không cần làm nóng trước, sẵn sàng sử dụng.
