Sử dụng và Bảo trì Kính hiển vi Sinh học

Sử dụng và Bảo trì Kính hiển vi Sinh học

Kính hiển vi sinh học được sử dụng để quan sát và nghiên cứu các lát cắt sinh học, tế bào sinh học, nuôi cấy vi khuẩn và mô sống, kết tủa chất lỏng, v.v.

Có thể quan sát các vật thể trong suốt hoặc mờ khác cũng như bột, hạt mịn và các vật thể khác. Hôm nay chúng ta hãy nói về việc sử dụng và hậu kỳ của kính hiển vi sinh học

Sử dụng kính hiển vi sinh học

(1) Sử dụng môi trường và thói quen làm việc

1. Môi trường sử dụng

Nơi làm việc của kính hiển vi phải sạch sẽ, khô ráo, không bị rung và không có khí ăn mòn.

2. Thói quen làm việc

(1) Chiều cao của bàn và ghế phải phù hợp.

(2) Khi kiểm tra bằng kính hiển vi, ngay cả khi sử dụng kính hiển vi một mắt, phải mở cả hai mắt đồng thời và quan sát mắt trái. Để vẽ hoặc ghi âm bằng mắt phải. Nếu mở một mắt và nhắm một mắt, mắt dễ bị mỏi và không thể nhìn lâu. Khi làm việc trong thời gian dài, có thể thay phiên nhau quan sát bằng hai mắt.

(2) Chuẩn bị trước khi sử dụng

1. Lắp đặt hệ thống quang

Đối với kính hiển vi mới mua hoặc đã tháo hệ thống quang học, kính hiển vi phải được lắp đặt trước khi sử dụng. Khi lắp đặt, để tránh bụi rơi xuống, nên lắp đặt theo thứ tự từ trên xuống dưới, tức là theo thứ tự của thị kính, vật kính, thấu kính tụ và gương phản xạ. Hình 10-3-1 là sơ đồ lắp đặt kính hiển vi. Mũi tên chỉ nơi gắn quang học.

Khi lắp đặt vật kính, nòng ống kính phải được nâng lên trước hoặc hạ thấp giá đỡ để giữ khoảng cách nhất định giữa bộ chuyển đổi và giá đỡ. Sau đó, giữ vật kính, đặt nó vào cổng vít của bộ chuyển đổi và xoay nhẹ ngược chiều kim đồng hồ. Sau khi vật kính được trang bị các hoa văn lụa, sau đó vặn nó theo chiều kim đồng hồ cho đến khi nó chặt vừa phải. Khi lắp vật kính nên lắp theo chiều kim đồng hồ từ nhỏ đến lớn theo độ phóng đại của vật kính. Khi chuyển đổi vật kính, không đẩy vật kính xoay bằng tay, nếu không trục quang học của vật kính sẽ bị lệch. Tốt nhất là giữ đĩa quay của bộ chuyển đổi bằng tay để xoay hoặc giữ vòng tròn có khía bên ngoài ở điểm nối với bộ chuyển đổi vật kính bằng tay để xoay.

Sau khi thị kính và vật kính được lắp đặt, hãy lắp tụ quang vào giá đỡ tụ quang dưới bàn soi. Chiều cao của phần chèn phải sao cho khi tụ quang được nâng lên điểm cao nhất, mặt cuối của thấu kính trên tụ quang thấp hơn một chút so với mặt phẳng của bệ đỡ, để ngăn lam kính va chạm với thấu kính của bình ngưng. Sau đó, siết chặt vít cố định của bình ngưng. Đối với kính hiển vi có nguồn sáng không dùng điện, gương phản xạ cuối cùng được lắp vào ổ cắm dưới bộ ngưng tụ.

2. Cân chỉnh trục quang

Ý nghĩa của việc hiệu chỉnh trục quang học là làm cho trục quang học chính của vật kính, thị kính, tụ quang và tâm của màng biến quang trùng nhau trên một đường thẳng. Do đó, nó còn được gọi là điều chỉnh đồng trục hoặc điều chỉnh trung tâm. Nếu trục quang bị lệch, quang sai sẽ tăng lên, đồng thời độ phân giải và độ sắc nét sẽ giảm.

Phương pháp kiểm tra là mở màng ngăn thay đổi đến mức tối đa, vặn vật kính có độ phóng đại thấp vào trục quang và hạ thấp nòng thấu kính sao cho khoảng cách giữa vật kính và bàn soi nhỏ hơn khoảng cách làm việc của vật kính thấu kính (dưới 5 mm). Không đặt mẫu vật, điều chỉnh góc của gương phản xạ để làm cho trường nhìn sáng nhất; hoặc điều chỉnh độ sáng của đèn nguồn sáng để làm cho trường nhìn phù hợp với độ sáng và bóng tối.

Sau đó, rút ​​thị kính ra và nhìn thẳng qua ống. Trong khi từ từ thu nhỏ hoặc mở màng ngăn thay đổi nhiều lần, khi màng ngăn được đóng ở mức tối thiểu, hình ảnh của màng ngăn (chỉ một chút vào lúc này) sẽ chỉ rơi vào tâm khẩu độ của vật kính. Khi khẩu độ được mở đến một mức độ nhất định, hình ảnh của khẩu độ phải trùng với vòng tròn màu đen của khẩu độ của vật kính. Nếu hai điều kiện trên được đáp ứng, điều đó có nghĩa là chúng "đồng trục". Nếu không, điều chỉnh là bắt buộc.

Cả thị kính và vật kính đều cố định và không thể điều chỉnh được. Điều chỉnh đồng trục chủ yếu là điều chỉnh vị trí của bình ngưng. Có hai vít điều chỉnh trục quang ở cả hai bên của giá đỡ tụ điện của một số kính hiển vi và trục có thể được căn chỉnh bằng cách điều chỉnh hai vít này. Một loại bộ tập trung khác được hỗ trợ bởi ba vít cách nhau 120 độ trên khung, một trong số đó được trang bị lò xo và có thể kéo dài; hai vít còn lại có thể xoay được. Điều chỉnh hai ốc vít để phù hợp với trục.

Sau khi hiệu chỉnh trục quang của kính hiển vi, nếu không tháo tụ điện hoặc vì lý do đặc biệt khác thì không cần hiệu chuẩn thường xuyên.

3. Chuẩn bị bệnh phẩm

Chuẩn bị mẫu vật chất lượng cao để sử dụng sau này.

(3) Cách sử dụng gương phản xạ, tụ quang và cách căn chỉnh ánh sáng 1. Điều chỉnh độ sáng

Đối với kính hiển vi sử dụng gương, gương phẳng thường được sử dụng để phản xạ ánh sáng tán xạ của mặt trời. Gương phản xạ lõm chỉ nên được sử dụng trong điều kiện ánh sáng yếu hoặc khi có vật gây xao nhãng bên ngoài cửa sổ.

Đối với kính hiển vi sử dụng nguồn sáng điện chỉ cần điều chỉnh độ sáng phù hợp.

2. Sử dụng máy cô đặc

(1) Điều chỉnh độ cao của bình ngưng. Trong trường hợp chiếu xạ ánh sáng song song, tiêu điểm của tụ quang chung cao hơn khoảng 1,25 mm so với tâm của mặt phẳng thấu kính ở đầu trên của nó. Khi sử dụng ống kính có độ phóng đại cao hoặc ống kính dầu, do độ phóng đại lớn nên độ sáng của hình ảnh phản chiếu nhỏ và cần có ánh sáng mạnh. Vì vậy, nên nâng tụ quang lên điểm cao nhất sao cho trọng tâm của tụ quang chỉ rơi trên mặt phẳng mẫu thử. Nhưng khi sử dụng vật kính có độ phóng đại thấp, tụ quang có thể được hạ xuống một cách hợp lý.

(2) Cách sử dụng khẩu độ thay đổi Khẩu độ thay đổi đóng hai vai trò. Một là kiểm soát quang thông hướng vào mẫu vật; hai là thay đổi khẩu độ số của bình ngưng. Trong hai vai, vai thứ hai chiếm ưu thế. Để tận dụng tối đa độ phân giải của vật kính, về nguyên tắc, khẩu độ số của tụ quang phải giống với khẩu độ của vật kính. Nếu không, độ phân giải hoặc độ rõ nét sẽ bị ảnh hưởng.

3. Phương pháp chiếu sáng

Đối với kính hiển vi sử dụng nguồn sáng điện, khi sử dụng chỉ cần điều chỉnh đèn có độ sáng thích hợp. Không có mục tiêu là cần thiết. Tuy nhiên, đối với kính hiển vi cấp thấp sử dụng ánh sáng tự nhiên, để thu được kết quả quan sát tốt thì phải tận dụng triệt để ánh sáng chiếu rọi. Do đó, ánh sáng nên được điều chỉnh trước khi kiểm tra kính hiển vi. Khi đối diện với ánh sáng, hãy xoay thấu kính có độ phóng đại thấp vào trục quang học, nâng cao tụ quang một cách thích hợp và mở màng chắn biến đổi đến mức tối đa. Sau đó, nhìn qua thị kính trong khi xoay gương cho đến khi trường nhìn sáng và rõ nhất. Nếu bạn sử dụng ánh sáng tự nhiên, hãy cố gắng tránh sự giao thoa của khung cửa sổ và cành cây bên ngoài cửa sổ.

(4) Lấy nét chính xác của vật kính

Sau khi chiếu sáng xong hoặc điều chỉnh ánh sáng thích hợp, hãy nâng ống thấu kính lên hoặc hạ thấp giá đỡ, kẹp thanh trượt mẫu trên bộ phận di chuyển, nghĩa là giá đỡ mẫu và di chuyển bộ phận cần kiểm tra đến tâm của lỗ đèn của sân khấu. Sau đó bắt đầu tập trung.

Bất kể loại kiểm tra nào được thực hiện, nó nên bắt đầu với một ống kính công suất thấp. Khi lấy nét, trước tiên hãy sử dụng tay quay thô để hạ thấp vành thấu kính sao cho khoảng cách giữa thấu kính trước của gương có độ phóng đại thấp và kính che nhỏ hơn một chút so với khoảng cách làm việc của vật kính (dưới 5mm). Để tránh vật kính đè lên tiêu bản, hãy nhìn từ bên cạnh. Sau đó, trong khi quan sát trường nhìn từ thị kính, hãy sử dụng tay quay thô để từ từ nâng vành thấu kính lên. Sau khi nhìn thấy hình ảnh đối tượng lần đầu tiên, hãy sử dụng tay quay tinh để tinh chỉnh tiêu điểm cho đến khi hình ảnh đối tượng rõ ràng nhất. Trường nhìn của vật kính có độ phóng đại thấp lớn, có lợi cho việc quan sát toàn bộ hình ảnh của mẫu vật. Bạn cũng có thể sử dụng máy di chuyển hoặc điều chỉnh tay quay theo chiều dọc và chiều ngang để tìm mục tiêu quan sát. Nếu cần, mục tiêu được tìm thấy có thể được di chuyển đến trung tâm của trường nhìn, sẵn sàng cho việc quan sát ống kính công suất cao.

Khi chuyển đổi từ vật kính có độ phóng đại thấp sang vật kính có độ phóng đại cao, nếu vật kính là thiết bị ban đầu của kính hiển vi và kính trượt và kính che được sử dụng đáp ứng tiêu chuẩn, thì thường có thể thực hiện "chuyển đổi chiều cao bằng nhau" . Tức là sau khi chuyển đổi, bạn có thể thấy hình ảnh rõ ràng miễn là bạn điều chỉnh một chút núm tinh chỉnh. Nhưng ống kính dầu không nhấn mạnh vào độ tiêu cự. Tốt nhất là nâng vành ống kính trước khi chuyển đổi, và cuối cùng lấy nét lại theo phương pháp lấy nét của ống kính công suất thấp.

Phương pháp sử dụng thấu kính dầu như sau: đầu tiên nâng nòng thấu kính lên, tháo phiến mẫu ra, hạ nhẹ bình ngưng xuống và nhỏ hai giọt dầu tuyết tùng lên thấu kính của bình ngưng (không được có bọt khí trong dầu .Nếu có, Nó có thể được loại bỏ bằng một thanh gỗ nhỏ), sau đó đặt phiến kính mẫu trở lại vị trí ban đầu và nâng bình ngưng sao cho bề mặt dưới của phiến kính tiếp xúc với dầu tuyết tùng. Bằng cách này, quá trình ngâm dầu của bình ngưng đã hoàn thành. Tiếp theo, nhỏ 1 giọt dầu tuyết tùng lên lớp phủ. Sau đó, nhìn từ bên cạnh và sử dụng điều chỉnh thô để hạ thấp vành thấu kính càng xa càng tốt cho đến khi thấu kính phía trước của thấu kính dầu được ngâm trong dầu tuyết tùng (nhưng chưa tiếp xúc với phiến kính), như vậy là hoàn thành quá trình ngâm dầu của vật kính. Sau đó, trong khi quan sát từ thị kính, sử dụng tay quay siêu nhỏ để từ từ nâng vành thấu kính lên (cẩn thận không vặn sai hướng và làm vỡ nắp kính) cho đến khi hình ảnh đối tượng rõ nét nhất xuất hiện trong trường nhìn.

Việc ngâm dầu của bình ngưng cũng có thể áp dụng một phương pháp nhỏ giọt dầu khác: đó là thay vì nhỏ trực tiếp dầu lên thấu kính của bình ngưng, hãy lật nắp trượt và nhỏ dầu xuống bề mặt dưới của nắp trượt, sau đó Xoay nó lại, căn chỉnh và đặt nó lên bộ cô đặc, sau đó nâng bộ cô đặc lên để hoàn thành quá trình ngâm dầu của bộ cô đặc. Mặc dù phương pháp này không quá trơn tru, nhưng nó an toàn hơn. Một số người sử dụng một thanh thủy tinh để tiếp xúc trực tiếp với chất ngưng tụ để bôi dầu tuyết tùng. Phương pháp này dễ làm xước ống kính và không nên sử dụng.

Khi sử dụng thấu kính dầu, không được phép thêm dầu tuyết tùng vào giữa bộ ngưng tụ và mẫu vật, nghĩa là không khí vẫn được sử dụng làm môi trường trên bộ ngưng tụ, nhưng điều này sẽ ảnh hưởng đến độ phân giải của vật kính.

Nếu bạn cần quay lại vật kính có độ phóng đại cao để quan sát sau khi sử dụng thấu kính dầu, hãy lau sạch dầu trên kính che để tránh làm nhiễm bẩn vật kính công suất cao. Tuy nhiên, dầu trên bộ tập trung không cần phải lau, miễn là khẩu độ được giảm một chút đúng cách.

Sau khi ống kính dầu được sử dụng, dầu tuyết tùng phải được lau sạch kịp thời. Có thể lau ống kính 1 hoặc 2 lần bằng giấy lau ống kính sạch để lau sạch hầu hết dầu. Sau đó lau hai lần bằng khăn giấy thấm nước xylene, và cuối cùng lau sạch bằng khăn giấy lau thấu kính. Phương pháp làm sạch của bình ngưng là như nhau. Nếu mẫu vật cần được bảo quản, dầu tuyết tùng trên phiến kính có thể được lau sạch bằng "giấy kéo". Đậy nắp kính bằng giấy lau thấu kính, nhỏ một giọt xylene lên giấy, kéo dải giấy khi còn ướt và lau sạch nhiều lần liên tiếp.

Cuối cùng, lưu ý: Trong toàn bộ quá trình lấy nét (đặc biệt là lấy nét của vật kính có độ phóng đại cao và thấu kính dầu), mọi chuyển động nên được thực hiện từ từ. Nếu không, hình ảnh đối tượng sẽ nhấp nháy và không thể tìm thấy mục tiêu quan sát.