Nguyên lý và đặc điểm cấu tạo của kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang sử dụng một điểm có hiệu suất phát sáng cao để phát ra một bước sóng ánh sáng nhất định (chẳng hạn như ánh sáng cực tím 3650 in hoặc ánh sáng xanh tím 4200 in) thông qua hệ thống lọc màu làm ánh sáng kích thích và kích thích các chất huỳnh quang trong mẫu phát ra nhiều loại màu sắc của huỳnh quang. Sau đó quan sát qua độ phóng đại của vật kính và thị kính. Bằng cách này, có thể dễ dàng nhận ra ngay cả khi huỳnh quang rất yếu trên nền mạnh, với độ nhạy cao. Nó chủ yếu được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc và chức năng của tế bào, cũng như thành phần hóa học. Cấu trúc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang bao gồm kính hiển vi quang học thông thường cộng với các phụ kiện như nguồn sáng huỳnh quang, bộ lọc kích thích, bộ tách chùm lưỡng sắc và bộ lọc chặn. Các nguồn sáng huỳnh quang thường sử dụng đèn thủy ngân siêu cao áp (50-200W), có thể phát ra ánh sáng có nhiều bước sóng khác nhau. Tuy nhiên, mỗi chất huỳnh quang có một bước sóng ánh sáng kích thích tạo ra huỳnh quang mạnh nhất, do đó, các bộ lọc kích thích (thường là các bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, lam và lục) cần được thêm vào để chỉ cho phép một bước sóng nhất định của ánh sáng kích thích xuyên qua và chiếu xạ. mẫu vật, trong khi hấp thụ tất cả các ánh sáng khác. Sau khi được chiếu xạ bằng ánh sáng kích thích, mỗi chất phát ra huỳnh quang nhìn thấy được dài hơn bước sóng chiếu xạ trong thời gian rất ngắn. Huỳnh quang có tính đặc hiệu và thường yếu hơn ánh sáng kích thích. Để quan sát huỳnh quang cụ thể, cần thêm chặn (hoặc triệt tiêu) phía sau vật kính và sử dụng kết hợp.
Sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi thông thường
1. Phương pháp chiếu sáng thường là kiểu chùm tia chiếu xuống, trong đó nguồn sáng được chiếu lên mẫu qua một vật kính;
2. Nguồn sáng là tia cực tím, có bước sóng ngắn hơn và độ phân giải cao hơn kính hiển vi thông thường;
3. Có hai bộ lọc đặc biệt, bộ lọc phía trước nguồn sáng được sử dụng để lọc ánh sáng nhìn thấy được và bộ lọc nằm giữa thị kính và vật kính được sử dụng để lọc tia cực tím để bảo vệ mắt người.
Kính hiển vi huỳnh quang cũng là một loại kính hiển vi quang học, với sự khác biệt chính là các bước sóng kích thích khác nhau. Điều này quyết định sự khác biệt về cấu tạo và cách sử dụng giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường.
Kính hiển vi huỳnh quang là một công cụ cơ bản cho hóa tế bào miễn dịch huỳnh quang. Nó được cấu tạo bởi các bộ phận chính như nguồn sáng, hệ thống tấm lọc, hệ thống quang học. Nó sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định để kích thích mẫu phát ra huỳnh quang và phóng đại nó qua hệ thống vật kính và thị kính để quan sát hình ảnh huỳnh quang của mẫu.
