Một số vấn đề trong việc sử dụng kính hiển vi tương phản pha:
(1) Đảo pha khi n'
(2) Hiệu ứng quầng sáng và mờ dần trong quá trình chụp ảnh của kính hiển vi tương phản pha, khi cấu trúc trở nên tối hơn do trễ pha, không phải là mất ánh sáng mà là kết quả của sự phân phối lại ánh sáng trên mặt phẳng hình ảnh. Do đó, ánh sáng biến mất rõ ràng ở vùng tối sẽ xuất hiện dưới dạng quầng sáng xung quanh vật thể tối hơn. Đây là nhược điểm của kính hiển vi tương phản pha, gây cản trở việc quan sát các cấu trúc tinh tế. Khi khẩu độ hình khuyên rất hẹp thì hiện tượng quầng sáng càng trầm trọng hơn. Một hiện tượng khác của kính hiển vi tương phản pha là hiệu ứng làm mờ, đề cập đến sự giảm độ tương phản ở các cạnh của một khu vực lớn hơn với cùng độ trễ pha được quan sát thấy trong quá trình quan sát độ tương phản pha.
(3) Ảnh hưởng của độ dày mẫu Khi quan sát sự khác biệt, độ dày của mẫu phải là 5 μm hoặc mỏng hơn. Khi sử dụng mẫu dày hơn, lớp trên của mẫu sẽ trong, trong khi lớp sâu hơn sẽ mờ và tạo ra giao thoa lệch pha và giao thoa tán xạ ánh sáng.
(4) Ảnh hưởng của kính che và trượt lên mẫu phải được che bằng kính che, nếu không thì vòng sáng của khẩu độ hình khuyên và vòng tối của tấm pha khó chồng lên nhau. Quan sát vi phân cũng có yêu cầu cao về chất lượng kính của lam kính và kính che. Khi có vết xước, độ dày không đồng đều hoặc không đồng đều có thể gây biến dạng vòng sáng và nhiễu pha. Ngoài ra, nếu phiến kính quá dày hoặc quá mỏng sẽ khiến khẩu độ hình khuyên lớn hơn hoặc nhỏ hơn.
Hiện nay, kính hiển vi quang học đã phát triển từ kính hiển vi sinh học truyền thống sang nhiều loại kính hiển vi chuyên dụng. Theo nguyên tắc hình ảnh, chúng có thể được chia thành:
① Kính hiển vi quang học hình học: bao gồm kính hiển vi sinh học, kính hiển vi ánh sáng rơi, kính hiển vi đảo ngược, kính hiển vi kim loại, kính hiển vi trường tối, v.v.
② Kính hiển vi quang học vật lý: bao gồm kính hiển vi tương phản pha, kính hiển vi phân cực, kính hiển vi giao thoa, kính hiển vi phân cực tương phản pha, kính hiển vi giao thoa tương phản pha, kính hiển vi huỳnh quang tương phản pha, v.v.
③ Kính hiển vi chuyển đổi thông tin: bao gồm kính hiển vi huỳnh quang, kính hiển vi kế, kính hiển vi phân tích hình ảnh, kính hiển vi âm thanh, kính hiển vi chụp ảnh, kính hiển vi truyền hình, v.v.
Liệt kê một số công dụng của kính hiển vi: a Kính hiển vi sinh học: Nói chung, kính hiển vi có thể được chia thành kính hiển vi soi nổi và kính hiển vi sinh học. Do mục đích và yêu cầu khác nhau nên nhiều nhánh đã ra đời nhưng nguyên tắc cơ bản vẫn giống nhau. Sự phân cực, độ tương phản pha, sự truyền qua và ánh sáng rơi vẫn được phân loại là kính hiển vi sinh học. Kính hiển vi soi nổi, còn được gọi là kính hiển vi giải phẫu, kính hiển vi rắn và kính hiển vi soi nổi, là một loại kính hiển vi đa năng. Nó dễ vận hành, yêu cầu thấp đối với mẫu vật, khoảng cách làm việc dài và có cảm giác ba chiều mạnh mẽ khi quan sát. Nó có thể được sử dụng để quan sát các vật thể vật lý hoặc thực hiện một số thao tác trên mẫu vật trong khi quan sát. Thay vì cắt lát mẫu vật như kính hiển vi sinh học, việc cắt lát đòi hỏi phải có công nghệ và thiết bị tương ứng. Do đó, kính hiển vi soi nổi có nhiều ứng dụng trong các lĩnh vực như vi điện tử, lắp ráp và bảo trì dụng cụ chính xác cũng như khắc vi mô. Được sử dụng rộng rãi trong giải phẫu và vi phẫu trong lĩnh vực sinh học và y học (hiện nay được phân loại là kính hiển vi phẫu thuật), nguồn sáng dùng trong sinh học và y học chỉ có thể là nguồn sáng lạnh (sợi quang); Được sử dụng trong công nghiệp để quan sát, lắp ráp, kiểm tra và các công việc khác của các bộ phận nhỏ và mạch tích hợp. Kính hiển vi kim loại: Nhiều người thích viết nó là "kính hiển vi kim loại". Kính hiển vi kim loại là kính hiển vi được sử dụng đặc biệt để quan sát cấu trúc kim loại của các vật thể mờ đục như kim loại và khoáng chất. Những vật thể mờ đục này không thể được quan sát bằng kính hiển vi truyền qua thông thường, do đó, điểm khác biệt chính giữa chúng và kính hiển vi thông thường là kính hiển vi truyền qua sử dụng ánh sáng phản xạ, trong khi kính hiển vi truyền qua sử dụng ánh sáng truyền qua để chiếu sáng. Trong kính hiển vi kim loại, chùm tia chiếu sáng được hướng từ thấu kính vật kính đến bề mặt của vật thể quan sát, được bề mặt phản xạ và sau đó quay trở lại thấu kính vật kính để chụp ảnh. Phương pháp chiếu sáng phản chiếu này cũng được sử dụng rộng rãi trong việc phát hiện các tấm silicon mạch tích hợp.
