Yêu cầu đối với việc chuẩn bị các mẫu thông thường cho kính hiển vi
Kính hiển vi đồng tiêu là một sản phẩm mới công nghệ cao mang tính thời đại được phát triển vào những năm 1980, và nó là một trong những công cụ phân tích quan trọng trong sinh học phân tử và khoa học đời sống ngày nay. Kính hiển vi đồng tiêu dựa trên hình ảnh kính hiển vi huỳnh quang có thêm thiết bị quét laze, sử dụng máy tính để xử lý hình ảnh để thu được hình ảnh huỳnh quang của cấu trúc vi mô bên trong tế bào hoặc mô và để quan sát những thay đổi về hình thái của nhiều máy tín hiệu sinh lý ở cấp độ dưới tế bào. Trở thành một công cụ nghiên cứu mạnh mẽ trong các lĩnh vực hình thái học, sinh học tế bào phân tử, khoa học thần kinh, dược học, di truyền học và các lĩnh vực khoa học khác.
Chuẩn bị mẫu cho kính hiển vi đồng tiêu là một bước quan trọng trước khi phát hiện. Các mẫu cần được dán nhãn bằng đầu dò huỳnh quang (đơn, đôi, ba).
các
Mẫu vật có thể là các mô sống hoặc cố định, hoặc các nền văn hóa bám dính cố định hoặc sống. Các tế bào nên được nuôi cấy trên đĩa nuôi cấy nhỏ đặc biệt của Confocal hoặc nắp đậy. Treo các tế bào, lắc hoặc thả các lát cắt và phủ bằng màng bọc có nắp đậy. Độ dày Zda của mẫu khoảng 1~2mm, độ dày của kính che được sử dụng phải nhỏ hơn 0.17mm và độ dày của kính trượt phải nằm trong khoảng 0.8~1.2 mm, và bề mặt nhẵn, độ dày đồng đều và không có huỳnh quang nhiễu rõ ràng. Môi trường gắn kết thường được sử dụng cho các mẫu cố định và glycerol được điều chế trong PBS có độ pH là 8.5-9 thường được sử dụng để gắn kết.
Yêu cầu chuẩn bị mẫu thường quy:
1. Lựa chọn thuốc nhuộm
Vì kính hiển vi đồng tiêu sử dụng tia laser có bước sóng đơn làm nguồn sáng, nên việc lựa chọn thuốc nhuộm huỳnh quang phải dựa trên bước sóng của tia laser được trang bị cho kính hiển vi đồng tiêu. Nếu có nhiều thuốc nhuộm huỳnh quang trong cùng một mẫu, thì bước sóng phát xạ của chúng cũng nên được xem xét càng nhiều càng tốt. Không chồng lên nhau để tránh các vấn đề về màu chéo.
2. Lựa chọn phương tiện mang mẫu
Nói chung, vật kính công suất cao của kính hiển vi đồng tiêu là thấu kính dầu, khẩu độ số của nó nhỏ và khoảng cách làm việc giữa thấu kính và mẫu được yêu cầu không quá 0.17mm. Slides và coverslips là tốt. Nếu đó là các tế bào lơ lửng hoặc các hạt lơ lửng, có thể sử dụng đĩa petri dành riêng cho kính hiển vi đồng tiêu để mang mẫu đi quan sát.
3. Lựa chọn phương tiện lắp đặt
Nếu mẫu chỉ cần được quan sát một lần và huỳnh quang không dễ bị dập tắt, bạn có thể chọn hỗn hợp glycerol có nồng độ nhất định để bịt kín phiến kính. Nếu mẫu cần được đặt trong một khoảng thời gian và được lấy nhiều lần, nên chọn phương tiện gắn dập tắt chống huỳnh quang để giảm mất tín hiệu huỳnh quang.
