Nguyên lý và đặc điểm cấu trúc của kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang sử dụng một điểm có hiệu suất phát sáng cao để phát ra ánh sáng có bước sóng nhất định (như tia cực tím 3650 hoặc ánh sáng xanh tím 4200) thông qua hệ thống lọc màu làm ánh sáng kích thích, sau đó kích thích các chất huỳnh quang trong mẫu phát ra huỳnh quang với các màu khác nhau, sau đó quan sát chúng thông qua sự khuếch đại của vật kính và thị kính. Bằng cách này, dưới nền tương phản mạnh, ngay cả khi huỳnh quang rất yếu, nó vẫn dễ dàng được xác định và có độ nhạy cao. Nó chủ yếu được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc, chức năng và thành phần hóa học của tế bào. Cấu trúc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang bao gồm kính hiển vi quang học thông thường và một số phụ kiện (như nguồn sáng huỳnh quang, bộ lọc kích thích, bộ tách chùm lưỡng sắc và bộ lọc chặn, v.v.). Nguồn sáng huỳnh quang —— Đèn thủy ngân siêu cao áp (50-200W) thường được sử dụng, có thể phát ra ánh sáng có bước sóng khác nhau, nhưng mỗi chất huỳnh quang có bước sóng ánh sáng kích thích tạo ra huỳnh quang mạnh nhất, vì vậy nó là cần thêm các bộ lọc kích thích (thường là các bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, xanh lam và xanh lục), để chỉ một bước sóng ánh sáng kích thích nhất định được truyền đến mẫu vật và tất cả các ánh sáng khác đều bị hấp thụ. Sau khi mỗi chất được chiếu xạ bằng ánh sáng kích thích, nó sẽ phát ra huỳnh quang nhìn thấy dài hơn bước sóng chiếu xạ trong thời gian rất ngắn. Huỳnh quang có tính đặc hiệu, thường yếu hơn ánh sáng kích thích. Để quan sát huỳnh quang cụ thể, cần phải chặn (hoặc triệt tiêu) phía sau thấu kính vật kính và phải được sử dụng cùng nhau.
Sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi thông thường
1. Chế độ chiếu sáng thường là từng đợt, nghĩa là nguồn sáng được chiếu lên mẫu thông qua thấu kính vật kính;
2. Nguồn sáng là tia cực tím có bước sóng ngắn và độ phân giải cao hơn kính hiển vi thông thường;
3. Có hai bộ lọc đặc biệt, một bộ lọc phía trước nguồn sáng dùng để lọc ánh sáng khả kiến, và một bộ lọc giữa thị kính và thấu kính vật kính dùng để lọc tia cực tím để bảo vệ mắt mọi người.
Kính hiển vi huỳnh quang cũng là một loại kính hiển vi quang học, điểm khác biệt chính là bước sóng kích thích của chúng khác nhau. Điều này quyết định sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường về cấu trúc và cách sử dụng.
Kính hiển vi huỳnh quang là công cụ cơ bản của hóa học tế bào miễn dịch huỳnh quang. Nó bao gồm nguồn sáng, hệ thống tấm lọc và hệ thống quang học. Nó sử dụng ánh sáng có bước sóng nhất định để kích thích mẫu vật phát ra huỳnh quang và phóng đại nó qua vật kính và hệ thống thị kính để quan sát hình ảnh huỳnh quang của mẫu vật.
