Nguyên lý và cấu tạo của kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang sử dụng nguồn sáng điểm có hiệu suất phát sáng cao, phát ra một bước sóng ánh sáng nhất định (như tia cực tím 3650 in hoặc ánh sáng xanh tím 4200 in) thông qua hệ thống lọc màu làm ánh sáng kích thích và kích thích các chất huỳnh quang trong mẫu phát ra nhiều màu huỳnh quang khác nhau. Sau đó, nó được quan sát thông qua độ phóng đại của vật kính và thị kính. Bằng cách này, ngay cả với huỳnh quang yếu, nó vẫn có thể dễ dàng nhận biết và có độ nhạy cao dưới nền tương phản mạnh, chủ yếu được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc và chức năng tế bào cũng như thành phần hóa học. Cấu trúc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang bao gồm kính hiển vi quang học thông thường và một số phụ kiện (như nguồn sáng huỳnh quang, bộ lọc kích thích, bộ tách chùm tia lưỡng sắc và bộ lọc chặn, v.v.). Nguồn sáng huỳnh quang - thường sử dụng đèn thủy ngân áp suất cực cao (50-200W), có thể phát ra ánh sáng có nhiều bước sóng khác nhau. Tuy nhiên, mỗi chất huỳnh quang có bước sóng ánh sáng kích thích tạo ra huỳnh quang mạnh nhất, do đó, cần thêm các bộ lọc kích thích (thường là bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, xanh lam và xanh lục) để chỉ cho phép một bước sóng ánh sáng kích thích nhất định đi qua và chiếu sáng. mẫu vật, đồng thời hấp thụ tất cả các ánh sáng khác. Sau khi được chiếu xạ bởi ánh sáng kích thích, mỗi chất phát ra huỳnh quang nhìn thấy được với bước sóng dài hơn sự chiếu xạ trong khoảng thời gian rất ngắn. Huỳnh quang có tính đặc hiệu và thường yếu hơn ánh sáng kích thích. Để quan sát huỳnh quang cụ thể, cần thêm bộ lọc chặn (hoặc triệt tiêu) phía sau thấu kính vật kính. Nó có hai chức năng: thứ nhất là hấp thụ và chặn ánh sáng kích thích đi vào thị kính để tránh làm nhiễu huỳnh quang và làm hỏng mắt; thứ hai, nó chọn lọc và cho phép huỳnh quang cụ thể đi qua, hiển thị màu huỳnh quang cụ thể. Cả hai loại bộ lọc phải được chọn để sử dụng cùng nhau.
Có hai loại kính hiển vi huỳnh quang dựa trên đường quang của chúng:
1. Kính hiển vi huỳnh quang truyền qua: Nguồn sáng kích thích được truyền qua vật liệu mẫu qua thiết bị ngưng tụ để kích thích huỳnh quang. Bộ thu ánh sáng trường tối thường được sử dụng hoặc bộ thu ánh sáng thông thường có thể được sử dụng để điều chỉnh gương phản xạ nhằm chuyển đổi ánh sáng kích thích và ánh sáng bên vào mẫu vật. Đây là một kính hiển vi huỳnh quang tương đối cũ. Ưu điểm của nó là huỳnh quang mạnh ở độ phóng đại thấp, trong khi nhược điểm của nó là huỳnh quang yếu đi khi độ phóng đại tăng. Vì vậy, tốt hơn là nên quan sát các vật liệu mẫu lớn hơn.
2. Kính hiển vi huỳnh quang chùm tia rơi Đây là loại kính hiển vi huỳnh quang mới được phát triển trong thời hiện đại. Không giống như ánh sáng kích thích trước đó, ánh sáng kích thích rơi từ thấu kính vật kính xuống bề mặt mẫu vật, sử dụng cùng một thấu kính vật kính làm tụ quang chiếu sáng và thấu kính vật kính để thu huỳnh quang. Cần phải thêm một bộ tách chùm tia màu kép vào đường dẫn quang, nằm ở góc 45 độ so với uranium ánh sáng. Ánh sáng kích thích được phản xạ vào vật kính và tập trung vào mẫu. Huỳnh quang do mẫu tạo ra, cũng như ánh sáng kích thích phản xạ từ bề mặt của thấu kính vật kính và kính che, đi vào vật kính đồng thời và quay trở lại bộ tách chùm tia lưỡng sắc, tách biệt sự kích thích và huỳnh quang. Kích thích dư sau đó được hấp thụ bởi bộ lọc chặn. Nếu sử dụng các bộ lọc kích thích/bộ tách chùm tia màu kép/bộ lọc chặn khác nhau, chúng có thể đáp ứng nhu cầu của các sản phẩm phản ứng huỳnh quang khác nhau. Ưu điểm của kính hiển vi huỳnh quang này là trường chiếu sáng tầm nhìn đồng đều, hình ảnh rõ ràng và độ phóng đại càng lớn thì huỳnh quang càng mạnh.
