Các lưu ý và thủ thuật khi sử dụng một số kính hiển vi tương phản pha
1) Lắp đặt thiết bị tương phản pha: tháo thấu kính tụ quang của kính hiển vi thông thường và lắp thấu kính tụ quang có màng chắn hình khuyên vào kính hiển vi phù hợp; tháo vật kính thông thường của kính hiển vi và thay thế bằng vật kính có tấm pha; thay thị kính bằng thị kính hội tụ cho kính hiển vi tương phản pha; các bộ lọc màu xanh lá cây đặc biệt (đôi khi không cần thiết) được đặt ở lối vào ánh sáng của nguồn sáng.
2) Căn chỉnh và lấy nét ánh sáng: Điều chỉnh thị kính lấy nét và vít điều chỉnh độ dày cho đến khi có thể nhìn thấy rõ vòng tròn màu trắng và vòng tròn màu đen trong trường nhìn. Vòng tròn màu đen được cố định và vòng tròn màu trắng có thể được di chuyển bằng cách điều chỉnh vít trên thiết bị ngưng tụ, sao cho vòng tròn màu đen và vòng tròn màu trắng hoàn toàn trùng khớp. Tháo thị kính hội tụ và thay thế bằng thị kính ban đầu của kính hiển vi để kiểm tra.
Phân tích các vấn đề trong việc sử dụng kính hiển vi tương phản pha
1. Ảnh hưởng của độ dày của mẫu Khi thực hiện quan sát tương phản pha, độ dày của mẫu phải từ 5 μm trở lên. Khi sử dụng mẫu dày hơn, lớp trên của mẫu rất rõ ràng, nhưng lớp sâu sẽ bị mờ và gây ra hiện tượng nhiễu lệch pha. và tán xạ ánh sáng.
2. Ảnh hưởng của kính che và kính trượt Mẫu phải được che bằng kính che, nếu không vòng sáng của màng hình khuyên và vòng tối của tấm pha khó chồng lên nhau. Quan sát tương phản pha cũng có yêu cầu cao về chất lượng kính của kính trượt và kính che. Khi có vết trầy xước, độ dày không đồng đều hoặc không đồng đều, hiện tượng méo vòng sáng và nhiễu pha sẽ xảy ra. Ngoài ra, khi slide quá dày hoặc quá mỏng, vòng sáng của màng hình khuyên sẽ trở nên lớn hơn hoặc nhỏ hơn.
3. Hiệu ứng quầng sáng và mờ dần Trong quá trình tạo ảnh của kính hiển vi tương phản pha, khi một cấu trúc trở nên tối do trễ pha, đó không phải là hiện tượng mất ánh sáng mà là kết quả của sự phân bố lại ánh sáng trên mặt phẳng ảnh. Vì vậy, ánh sáng dường như bị mất trong các vùng tối sẽ xuất hiện dưới dạng quầng sáng xung quanh các vật thể tối hơn. Đây là một nhược điểm của kính hiển vi tương phản pha, cản trở việc quan sát các cấu trúc mịn và hiện tượng quầng sáng nghiêm trọng hơn khi màng hình khuyên rất hẹp. Một hiện tượng khác trong kính hiển vi tương phản pha là hiệu ứng đổ bóng, ám chỉ sự mất độ tương phản ở các cạnh của một khu vực lớn hơn với cùng độ trễ pha khi quan sát bằng độ tương phản pha.
4. Sự đảo pha Khi n'n, độ tương phản sáng tối của hình ảnh chỉ ngược nhau, đó gọi là sự đảo pha. Không thể nhận ra khi độ lệch pha δ=0, và độ tương phản trở nên lớn hơn khi tăng δ, và hiện tượng đảo pha sẽ xuất hiện khi δ tiếp tục tăng đến một giá trị nhất định. Khi sử dụng vật kính có giá trị hấp thụ cao 90 phần trăm (độ tương phản cao), giá trị biến đổi này vào khoảng 0.55λ và khi sử dụng vật kính có giá trị hấp thụ tiêu chuẩn 70 phần trăm, giá trị này vào khoảng 0,33λ . Nên sử dụng các vật kính có giá trị độ hấp thụ cao hơn để giải quyết các chênh lệch đường quang nhỏ hơn.
