Kính hiển vi vi sinh đếm trực tiếp
nguyên lý thí nghiệm
Đếm trực tiếp dưới kính hiển vi sử dụng máy đo hemocytometer là phương pháp đếm vi sinh vật thường được sử dụng. Ưu điểm của phương pháp này là trực quan và nhanh chóng. Đặt huyền phù vi khuẩn đã pha loãng thích hợp (hoặc huyền phù bào tử) vào buồng đếm giữa phiến kính và kính che của máy đo huyết sắc tố, và đếm dưới kính hiển vi. Vì thể tích của buồng đếm là cố định (0.1mm2), nó có thể được chuyển đổi thành tổng số vi sinh vật trên một đơn vị thể tích theo số lượng vi sinh vật được quan sát dưới kính hiển vi. Bởi vì phương pháp này đếm tổng số vi khuẩn sống và chết, nên nó còn được gọi là phương pháp đếm tổng số vi khuẩn.
Hemocytometer thường là một lam kính đặc biệt trên đó bốn rãnh tạo thành ba bệ. Bệ ở giữa được chia thành hai nửa bằng một rãnh ngang ngắn. Một lưới được khắc trên nền tảng ở mỗi bên. Mỗi lưới được chia thành chín ô vuông lớn. Quảng trường lớn ở giữa là phòng đếm. Vi sinh vật được đếm trong buồng đếm.
Quy mô của phòng đếm thường có hai thông số kỹ thuật, một là hình vuông lớn được chia thành 16 ô vuông ở giữa và mỗi ô vuông ở giữa được chia thành 25 ô vuông nhỏ (Hình Ⅷ-2); cái còn lại là một hình vuông lớn Hình vuông được chia thành 25 ô vuông ở giữa và mỗi ô vuông ở giữa được chia thành 16 ô vuông nhỏ (Hình Ⅷ-1, C). Nhưng dù là loại bảng đếm nào thì số ô nhỏ trong mỗi ô lớn đều như nhau, tức là 16×25=400 ô nhỏ.
Độ dài cạnh của mỗi hình vuông lớn là 1 mm, và diện tích của mỗi hình vuông lớn là 1 mm2. Sau khi kính đậy được đậy lại, chiều cao giữa kính trượt và kính đậy là 0.1 mm, do đó thể tích của buồng đếm là 0.1mm3.
Khi đếm, thường đếm tổng số vi khuẩn trong năm ô vuông ở giữa, sau đó lấy giá trị trung bình của mỗi ô vuông ở giữa, sau đó nhân với 16 hoặc 25 để có tổng số vi khuẩn trong một ô vuông lớn, sau đó chuyển đổi thành tổng số vi khuẩn trong 1ml dung dịch vi khuẩn.
thiết bị phòng thí nghiệm
Hemocytometer, kính hiển vi, coverslip, mao quản vô trùng;
Vật liệu thí nghiệm
huyền dịch Saccharomyces cerevisiae
Quy trình thí nghiệm (phương pháp đếm trực tiếp bằng kính hiển vi vi sinh vật)
1. pha loãng
Pha loãng huyền dịch Saccharomyces cerevisiae đúng cách. Nếu dung dịch vi khuẩn không đặc thì không cần pha loãng.
2. Phòng đếm vi thể
Trước khi thêm mẫu, kiểm tra bằng kính hiển vi khoang đếm của đĩa đếm. Nếu có bụi bẩn cần phải làm sạch trước khi đếm.
3. thêm mẫu
Đậy tấm thủy tinh kế khô và sạch bằng một tấm kính đậy, sau đó sử dụng ống nhỏ giọt miệng hẹp vô trùng để nhỏ một giọt dung dịch Saccharomyces cerevisiae đã pha loãng từ mép của tấm kính che (không quá nhiều), sao cho dung dịch vi khuẩn gần với khoảng trống dọc theo khoảng trống. Thẩm thấu mao dẫn tự đi vào buồng đếm và buồng đếm chung có thể chứa đầy chất lỏng vi khuẩn. Cẩn thận không có bọt khí.
4. đếm kính hiển vi
Sau khi nghỉ ngơi trong 5 phút, đặt máy đo hemocytometer lên bàn kính hiển vi, trước tiên sử dụng thấu kính công suất thấp để tìm vị trí của buồng đếm, sau đó chuyển sang thấu kính công suất cao để đếm. Nếu thấy dung dịch vi khuẩn quá đặc hoặc quá loãng trước khi đếm cần điều chỉnh lại độ loãng trước khi đếm. Việc pha loãng mẫu nói chung cần khoảng
5-10 ô phù hợp. Mỗi buồng đếm chọn vi khuẩn trong 5 ô ở giữa (tùy chọn 4 góc và ô ở giữa) để đếm. Vi khuẩn trên đường kẻ ô thường chỉ được tính ở đường trên và đường bên phải. Trường hợp nấm men nảy chồi, khi kích thước cơ thể chồi đạt 1/2 tế bào mẹ thì đếm 2 vi khuẩn. Đếm một mẫu để tính hàm lượng vi khuẩn trong mẫu từ các giá trị được đếm trong hai ngăn đếm.
5. Vệ sinh Máy đo huyết áp
Sau khi sử dụng, rửa sạch đĩa đếm tế bào máu trên vòi bằng vòi nước, không rửa bằng vật cứng và tự làm khô hoặc bằng máy sấy tóc sau khi rửa. Kiểm tra bằng kính hiển vi, quan sát xem có vi khuẩn còn sót lại hoặc các chất lắng đọng khác trong mỗi tế bào hay không. Nếu chưa sạch thì phải rửa đi rửa lại nhiều lần cho đến khi sạch.
