Kiến thức về kính hiển vi huỳnh quang đồng tiêu
Nguyên tắc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang đồng tiêu: một nguồn sáng điểm được sử dụng để chiếu xạ mẫu vật và một điểm sáng nhỏ được xác định rõ được hình thành trên mặt phẳng tiêu cự. gồm các bộ chia. Bộ tách chùm gửi huỳnh quang trực tiếp đến máy dò. Có một lỗ kim ở phía trước nguồn sáng và máy dò, tương ứng được gọi là lỗ kim chiếu sáng và lỗ kim phát hiện. Kích thước hình học của cả hai giống nhau, khoảng 100-200nm; so với điểm sáng trên mặt phẳng tiêu điểm, cả hai liên hợp với nhau, nghĩa là điểm sáng đi qua một loạt thấu kính, và cuối cùng có thể tập trung vào lỗ kim chiếu sáng và lỗ kim phát hiện cùng một lúc. Bằng cách này, ánh sáng từ mặt phẳng tiêu điểm có thể được hội tụ trong phạm vi của lỗ phát hiện, trong khi ánh sáng tán xạ từ bên trên hoặc bên dưới mặt phẳng tiêu điểm bị chặn bên ngoài lỗ phát hiện và không thể chụp ảnh được. Tia laser quét từng điểm mẫu và ống nhân quang sau khi phát hiện lỗ kim cũng thu được hình ảnh tiêu điểm của điểm sáng tương ứng từng điểm, được chuyển đổi thành tín hiệu kỹ thuật số và truyền đến máy tính, cuối cùng được tổng hợp thành rõ ràng ảnh đồng tiêu của toàn bộ mặt phẳng tiêu cự trên màn hình.
Mỗi hình ảnh mặt phẳng tiêu cự thực sự là một mặt cắt quang học của mẫu vật và mặt cắt quang học này luôn có độ dày nhất định, còn được gọi là mặt cắt mỏng quang học. Do cường độ ánh sáng tại tiêu điểm lớn hơn nhiều so với cường độ tại điểm không tiêu cự và ánh sáng của mặt phẳng không tiêu cự được lọc bởi lỗ kim, nên độ sâu trường của hệ thống tiêu cự xấp xỉ bằng 0 và quét dọc theo Z -axis có thể thực hiện chụp cắt lớp quang học, tạo thành một Quan sát phần quang học hai chiều tại điểm tập trung của mẫu. Kết hợp quét mặt phẳng XY (mặt phẳng tiêu cự) với quét trục Z (trục quang), có thể thu được hình ảnh ba chiều của mẫu bằng cách tích lũy hình ảnh hai chiều của các lớp liên tục và được xử lý bằng phần mềm máy tính đặc biệt.
