Cải thiện lợi ích của kính hiển vi đa điểm quét laser
Kính hiển vi đa điểm quét laser là một cải tiến lớn của kính hiển vi quang học, chủ yếu để quan sát cấu trúc sâu của tế bào sống, tế bào và mô cố định, đồng thời có thể thu được cấu trúc mặt phẳng Z nhiều lớp rõ ràng và sắc nét, nghĩa là các lát cắt quang học và có thể xây dựng Cấu trúc rắn ba chiều của mẫu vật. Kính hiển vi đồng tiêu sử dụng nguồn sáng laser, được mở rộng để lấp đầy toàn bộ mặt phẳng tiêu cự phía sau của vật kính, sau đó hội tụ thành một điểm rất nhỏ trên mặt phẳng tiêu điểm của mẫu vật thông qua hệ thống thấu kính của vật kính. Tùy thuộc vào khẩu độ số của vật kính, đường kính của điểm chiếu sáng sáng nhất là khoảng 0,25 ~ 0,8 μm và độ sâu khoảng 0,5 ~ 1,5 ừm. Kích thước của tiêu điểm phụ thuộc vào thiết kế của kính hiển vi, bước sóng laser, đặc điểm của vật kính, cài đặt trạng thái của bộ phận quét và bản chất của mẫu vật. Kính hiển vi trường có phạm vi chiếu sáng và độ sâu lớn, trong khi kính hiển vi đồng tiêu có độ chiếu sáng tập trung vào một tiêu điểm trên mặt phẳng tiêu cự. Ưu điểm cơ bản nhất của kính hiển vi đồng tiêu là nó có thể thực hiện phân cắt quang học tốt các mẫu huỳnh quang dày (lên đến 50 μm hoặc hơn), với độ dày khoảng 0,5 đến 1,5 μm. Một loạt các hình ảnh mặt cắt quang học có thể thu được bằng cách di chuyển mẫu lên và xuống bằng động cơ bước trục Z của kính hiển vi. Việc thu thập thông tin hình ảnh được kiểm soát trong một mặt phẳng chính xác và sẽ không bị nhiễu bởi tín hiệu từ các vị trí khác trên mẫu vật. Sau khi loại bỏ ảnh hưởng của huỳnh quang nền và tăng tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu, độ tương phản và độ phân giải của ảnh đồng tiêu được cải thiện đáng kể so với ảnh huỳnh quang chiếu sáng trường truyền thống. Trong nhiều mẫu vật, nhiều thành phần cấu trúc phức tạp được đan xen vào nhau để tạo thành các hệ thống phức tạp, nhưng khi thu thập đủ các phần quang học, chúng ta có thể tái tạo lại chúng ở dạng 3D thông qua phần mềm. Phương pháp thử nghiệm này đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học để làm sáng tỏ mối quan hệ cấu trúc và chức năng phức tạp giữa các tế bào hoặc mô.
