Cách chọn kính hiển vi huỳnh quang phù hợp
Kính hiển vi huỳnh quang là một thiết bị hình ảnh hiển vi tiêu chuẩn cho các phòng thí nghiệm và khoa giải phẫu bệnh. Nó sử dụng các đặc tính huỳnh quang để quan sát và chụp ảnh. Nó được sử dụng rộng rãi trong sinh học tế bào, sinh học thần kinh, thực vật học, vi sinh, bệnh học, di truyền học và các lĩnh vực khác. Hình ảnh huỳnh quang có ưu điểm là độ nhạy cao và độ đặc hiệu cao, rất phù hợp để quan sát sự phân bố của các protein và bào quan cụ thể trong mô và tế bào, nghiên cứu về sự tập trung và tương tác, theo dõi các quá trình năng động của sự sống như thay đổi nồng độ ion , vân vân.
Lựa chọn kính hiển vi
Kính hiển vi huỳnh quang chủ yếu được chia thành ba loại: kính hiển vi huỳnh quang thẳng đứng (thích hợp để cắt), kính hiển vi huỳnh quang đảo ngược (thích hợp cho các tế bào sống, có tính đến việc cắt), kính hiển vi huỳnh quang soi nổi (thích hợp cho các mẫu vật lớn hơn, chẳng hạn như thực vật, cá ngựa vằn (người lớn/ phôi) , medaka, cơ quan chuột/chuột, v.v.).
Lựa chọn khối lọc huỳnh quang
Ngoài việc xem xét bước sóng kích thích và phát xạ của đầu dò huỳnh quang, việc lựa chọn khối lọc cũng cần xem xét liệu có kích thích không đặc hiệu và màu chéo đối với các mẫu được dán nhãn nhiều màu hay không. Trong thử nghiệm, chúng tôi sẽ cố gắng chọn bước sóng gần nhất với cực đại kích thích để kích thích và phạm vi thu phải bao gồm cực đại phát xạ. Ví dụ: đỉnh kích thích của Alexa Fluor 488 là 500nm và có thể chọn bộ lọc kích thích 480/40 trong kính hiển vi huỳnh quang. Các khối lọc huỳnh quang thường được sử dụng trong kính hiển vi huỳnh quang có thể được chia thành hai loại: long pass (viết tắt là LP) và band pass (viết tắt là BP), cũng cần được lựa chọn theo nhu cầu.
Lựa chọn nguồn sáng huỳnh quang
Các nguồn sáng huỳnh quang được sử dụng phổ biến hiện nay bao gồm đèn thủy ngân, đèn halogen kim loại và nguồn sáng LED đã phát triển nhanh chóng trong những năm gần đây. Quang phổ của nguồn sáng huỳnh quang là liên tục và không liên tục, và năng lượng sẽ khác nhau ở các dải khác nhau. Do dải phổ tương đối hẹp, năng lượng đầu ra ổn định hơn, tuổi thọ cao, an toàn và bảo vệ môi trường cùng nhiều ưu điểm khác, nguồn sáng LED đang dần trở thành nguồn sáng chính của kính hiển vi huỳnh quang.
kính hiển vi đồng tiêu
Trong quan sát bằng kính hiển vi huỳnh quang truyền thống, do sự chồng chéo của các chất đánh dấu huỳnh quang và cấu trúc tự phát huỳnh quang, chúng được kết hợp chặt chẽ với nhau, trong khi vật kính của kính hiển vi huỳnh quang epi truyền thống không chỉ thu thập ánh sáng từ mặt phẳng tiêu cự mà còn thu thập ánh sáng tán xạ bên trên và bên dưới. mặt phẳng tiêu điểm , dẫn đến độ phân giải và độ tương phản của hình ảnh bị giảm đáng kể.
Hình ảnh đồng tiêu giải quyết vấn đề này bằng cách chỉ phát hiện phần ánh sáng phản xạ từ mặt phẳng tiêu điểm. Nguồn sáng đi qua một lỗ kim để tạo thành một điểm sáng nhỏ và mịn trên mặt phẳng tiêu điểm. Ánh sáng phát ra từ tiêu diện được thu lại bởi vật kính. Phần lớn huỳnh quang phát ra từ điểm trên hoặc dưới tiêu diện của vật kính không thể hội tụ về lỗ nhỏ. Chỉ có huỳnh quang nằm trong mặt phẳng tiêu cự và một phần nhỏ của huỳnh quang lệch tiêu điểm mới có thể đi qua lỗ kim, trong khi các chùm ánh sáng bên ngoài mặt phẳng tiêu điểm hội tụ ở phía trước hoặc sau của tấm lỗ kim và bị chặn đi vào máy dò thông qua lỗ kim. Hình ảnh được phát hiện là hình ảnh từ mặt phẳng tiêu điểm, vì vậy chất lượng hình ảnh cuối cùng được cải thiện rất nhiều.
Do những ưu điểm và tính khả thi của các chức năng của kính hiển vi đồng tiêu quét laser, kính hiển vi đồng tiêu là một trợ lý thí nghiệm không thể thiếu trong lĩnh vực sinh học tế bào, thực vật học và nghiên cứu tế bào có độ chính xác cao. Đồng thời, trong trung tâm nghiên cứu khoa học trong tương lai, nó sẽ là công cụ nghiên cứu khoa học cơ bản và cốt lõi nhất.
