Bạn biết bao nhiêu về kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang thường sử dụng đèn thủy ngân cường độ cao làm nguồn sáng kích thích. Các bộ lọc được sử dụng để lọc ánh sáng không mong muốn, chỉ để lại ánh sáng tinh khiết, cường độ cao kích thích fluorophore. Sau khi ánh sáng đơn sắc chiếu mẫu qua vật kính, mẫu sẽ bị kích thích phát ra ánh sáng (huỳnh quang), và cả ánh sáng huỳnh quang và ánh sáng kích thích sẽ quay trở lại dọc theo đường quang học của vật kính. Trong trường hợp này, cần có gương lưỡng sắc để lọc ánh sáng kích thích. , chỉ cho phép phát quang mà chúng ta cần nhìn xuyên qua.
Huỳnh quang này đến thị kính dọc theo đường ánh sáng của kính hiển vi, sau đó đi vào mắt chúng ta, nơi chúng ta có thể nhìn thấy huỳnh quang phát ra từ fluorophore.
Kiểm tra trước và điều chỉnh kính hiển vi huỳnh quang:
(1) Trước mỗi lần quan sát huỳnh quang, cần thường xuyên kiểm tra căn chỉnh dây tóc, tiêu điểm đường quang, màng khẩu độ và cài đặt màng trường của thiết bị huỳnh quang.
(2) Bộ lọc kích thích/phát xạ huỳnh quang cần thiết đã được lắp vào bộ chuyển đổi hay chưa, liệu vật kính của kính hiển vi huỳnh quang có được cấu hình đúng hay không và loại bỏ các vết dầu và bụi trên thấu kính phía trước của vật kính.
(3) Nếu tiến hành quan sát độ tương phản pha của ánh sáng truyền qua đồng thời, thì cần kiểm tra sự liên hợp giữa tâm của tụ quang và vòng tương phản pha đối diện với vật kính.
(4) Kiểm tra xem vật mang mẫu (kính trượt, kính đậy và các dụng cụ khác) có bị phủ chất lỏng hoặc bụi hay không và độ dày có nằm trong phạm vi khoảng cách làm việc đã hiệu chuẩn của vật kính hay không. Mẫu được cắt lát không được quá dày, tốt nhất là Nhỏ hơn hoặc bằng 10 μm.
(5) Vì nguồn chiếu sáng có chứa tia cực tím nên phía trên mặt trước sân khấu phải đặt một tấm chắn sáng màu nâu để ngăn tia cực tím gây hại cho võng mạc.
(6) Sự mất ổn định điện áp sẽ làm giảm tuổi thọ của đèn thủy ngân cao áp và nguồn điện của nguồn sáng được trang bị bộ ổn định điện áp.
(7) Để kéo dài tuổi thọ của đèn thủy ngân, có thể tắt nó sau khi bật 15 phút; Sau khi tắt nguồn huỳnh quang của đèn thủy ngân, cần đợi ít nhất 10 phút để khởi động lại hơi thủy ngân để hạ nhiệt và trở lại trạng thái ban đầu, nếu không tuổi thọ của đèn sẽ bị ảnh hưởng.
Quan sát hình ảnh bằng kính hiển vi huỳnh quang:
(1) Khoảng 5-10 phút sau khi bật nguồn sáng huỳnh quang, cường độ ánh sáng kích thích có xu hướng ổn định và mẫu được nạp để quan sát; để ngăn chặn hiện tượng dập tắt huỳnh quang của mẫu do ánh sáng kích thích quá mức gây ra trong quá trình lấy nét và tìm kiếm vật thể, trước tiên hãy thu nhỏ kính hiển vi huỳnh quang Điều chỉnh ánh sáng kích thích ở cường độ vừa phải bằng màng khẩu độ hoặc thêm bộ lọc ND, và di chuyển giai đoạn mẫu thường xuyên. Sau khi xác nhận hình ảnh phản chiếu, hãy điều chỉnh sang trạng thái huỳnh quang để chụp và quay.
(2) Điều chỉnh cho chất lượng hình ảnh kém. Ngoài các yếu tố chuẩn bị mẫu, các điều chỉnh cần thiết có thể được thực hiện là:
① Loại trừ các thiết bị chắn sáng hoặc hạn chế ánh sáng trong đường dẫn quang hình ảnh, chẳng hạn như phụ kiện DIC, bộ lọc ND, v.v.
②Điều chỉnh lại tiêu cự máy thu và kích thước màng khẩu độ của kính hiển vi huỳnh quang.
③ Điều chỉnh cẩn thận vòng hiệu chỉnh chênh lệch độ bao phủ của vật kính kính hiển vi huỳnh quang.
Điểm ứng dụng của kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang sử dụng hình ảnh "huỳnh quang tím". Nếu bước sóng kích thích được chọn nằm trong vùng cực tím gần (320-400nm), không nhìn thấy được bằng mắt thường, thì phổ phát xạ của huỳnh quang cũng ngắn hơn bước sóng trung bình của các nguồn sáng gương sáng thông thường. cải thiện. Các photon năng lượng cao va chạm với các electron, làm cho các electron chuyển từ trạng thái cơ bản sang trạng thái kích thích. Các electron ở trạng thái kích thích rất không ổn định và sẽ rơi trở lại trạng thái cơ bản. Trong quá trình này, một phần năng lượng nhiệt sẽ bị tiêu hao và các photon mới sẽ được phát ra. Photon mới có năng lượng thấp hơn photon ban đầu và do đó có bước sóng dài hơn. Do bước sóng photon mới khác với bước sóng photon của ánh sáng tới, nên hai chùm ánh sáng có bước sóng khác nhau được tách ra bằng một phương pháp xử lý quang học nhất định, do đó chúng ta chỉ nhìn thấy các photon mới phát ra (tín hiệu huỳnh quang), nghĩa là, kính hiển vi huỳnh quang nhìn thấy hình ảnh huỳnh quang.
