Các thông số kỹ thuật của kính hiển vi huỳnh quang Phương pháp và kỹ thuật hiển vi huỳnh quang
Thông số kỹ thuật của kính hiển vi huỳnh quang 1. Thị kính góc rộng 2. Vật kính tiêu sắc 3. Bộ chuyển đổi vật kính bốn lỗ 4. Thiết bị huỳnh quang Epi Hệ thống kích thích xanh lam (B) xanh lục (G) 10đèn thủy ngân 0W 5. Cơ chế điều chỉnh lấy nét thô và tinh đồng trục: điều chỉnh Khoảng lấy nét: 15mm Giá trị lưới vi chuyển động: 0,002mm 6. Bàn cơ hai lớp Khoảng chuyển động dọc: 70 mm Khoảng chuyển động ngang: 50 mm
Thông số kỹ thuật kính hiển vi huỳnh quang
1. Thị kính góc rộng
2. Vật kính tiêu sắc
3. Ống mũi bốn lỗ
4. Thiết bị huỳnh quang Epi hệ thống kích thích màu xanh lam (B) xanh lá cây (G) đèn thủy ngân 100W
5. Cơ chế điều chỉnh lấy nét thô và tinh đồng trục: phạm vi lấy nét 15mm giá trị lưới chuyển động tinh 0.002mm
6. Bàn làm việc cơ khí hai lớp
Phạm vi di chuyển dọc: 70 mm Phạm vi di chuyển ngang: 50 mm
Kỹ năng và phương pháp hiển vi huỳnh quang
(1) Cầu trượt kính
Độ dày của lam kính phải nằm trong khoảng từ 0.8 đến 1.2 mm. Một phiến kính quá dày sẽ một mặt hấp thụ nhiều ánh sáng hơn, mặt khác, ánh sáng kích thích không thể tập trung vào mẫu vật. Các phiến kính phải nhẵn, có độ dày đồng đều và không có hiện tượng tự phát huỳnh quang rõ ràng. Đôi khi phiến kính thạch anh được sử dụng.
(2) Kính che
Độ dày của kính phủ khoảng 0.17mm, nhẵn. Để tăng cường ánh sáng kích thích, cũng có thể sử dụng kính che phủ giao thoa, là loại kính che phủ đặc biệt được phủ một số lớp chất (chẳng hạn như magiê florua) có tác dụng giao thoa khác nhau đối với ánh sáng có bước sóng khác nhau, có thể tạo ra huỳnh quang diễn ra suôn sẻ. Ánh sáng kích thích đi qua và phản xạ, và ánh sáng kích thích phản xạ này kích thích mẫu vật.
(3) Mẫu vật
Các lát mô hoặc các mẫu vật khác không được quá dày. Nếu nó quá dày, phần lớn ánh sáng kích thích sẽ được tiêu thụ ở phần dưới của mẫu vật, trong khi phần trên được quan sát trực tiếp bởi vật kính sẽ không bị kích thích hoàn toàn. Ngoài ra, tế bào chồng chéo hoặc tạp chất bao phủ, ảnh hưởng đến bản án.
(4) Chất gắn kết
Glycerin thường được sử dụng làm chất gắn kết, chất này phải không có tự phát huỳnh quang, không màu và trong suốt, đồng thời độ sáng của huỳnh quang sáng hơn ở pH 8.5-9.5 và không dễ phai nhanh chóng. Do đó, một hỗn hợp bằng nhau của glycerol và 0.5mol/l dung dịch đệm cacbonat có độ pH từ 9.0 đến 9,5 thường được sử dụng làm chất gắn kết.
(5) dầu gương
Nói chung, khi quan sát mẫu vật bằng kính hiển vi huỳnh quang trường tối và thấu kính ngâm trong dầu, phải sử dụng dầu ngâm. Tốt nhất là sử dụng dầu ngâm đặc biệt không huỳnh quang. Glycerin ở trên cũng có thể dùng thay thế, cũng có thể dùng paraffin lỏng, nhưng chiết suất thấp, ảnh hưởng một chút đến chất lượng hình ảnh. Ảnh hưởng.
Nguyên lý và đặc điểm cấu tạo của kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang sử dụng một điểm có hiệu suất phát sáng cao để phát ra ánh sáng có bước sóng nhất định (như ánh sáng cực tím 3650 in hoặc ánh sáng xanh tím 4200 in) qua hệ thống kính lọc làm ánh sáng kích thích để kích thích các chất huỳnh quang trong mẫu vật phát ra huỳnh quang. màu sắc khác nhau Sau đó, quan sát qua độ phóng đại của vật kính và thị kính. Bằng cách này, dưới một nền tương phản mạnh, ngay cả khi huỳnh quang rất yếu, rất dễ xác định và có độ nhạy cao. Nó chủ yếu được sử dụng để nghiên cứu cấu trúc và chức năng tế bào và thành phần hóa học. Cấu trúc cơ bản của kính hiển vi huỳnh quang bao gồm kính hiển vi quang học thông thường cộng với một số phụ kiện (chẳng hạn như nguồn sáng huỳnh quang, bộ lọc kích thích, bộ tách chùm tia hai màu và bộ lọc chặn, v.v.). Nguồn sáng huỳnh quang—thường sử dụng đèn thủy ngân áp suất cực cao (50-200W), có thể phát ra ánh sáng có nhiều bước sóng khác nhau, nhưng mỗi chất huỳnh quang có bước sóng kích thích tạo ra huỳnh quang mạnh nhất, do đó, bộ lọc kích thích ( Nói chung, có các bộ lọc kích thích tia cực tím, tím, xanh dương và xanh lục), chỉ cho phép ánh sáng kích thích có bước sóng nhất định đi qua và chiếu xạ mẫu vật, đồng thời hấp thụ ánh sáng khác. Sau khi mỗi chất được chiếu xạ bằng ánh sáng kích thích, nó sẽ phát ra huỳnh quang nhìn thấy được với bước sóng dài hơn bước sóng chiếu xạ trong thời gian rất ngắn. Huỳnh quang là cụ thể và thường yếu hơn ánh sáng kích thích. Để quan sát huỳnh quang cụ thể, phải thêm chức năng chặn (hoặc triệt tiêu) phía sau vật kính và được sử dụng cùng với nó.
Sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi thông thường
1. Phương pháp chiếu sáng thường là episcopic, tức là chiếu nguồn sáng lên mẫu qua vật kính;
2. Nguồn sáng là tia cực tím, bước sóng ngắn hơn và độ phân giải cao hơn so với kính hiển vi thông thường;
3. Có hai bộ lọc đặc biệt, bộ lọc phía trước nguồn sáng được sử dụng để lọc ánh sáng nhìn thấy được và bộ lọc nằm giữa thị kính và vật kính được sử dụng để lọc tia cực tím để bảo vệ mắt người.
Kính hiển vi huỳnh quang cũng là một loại kính hiển vi quang học, điểm khác biệt chính là bước sóng kích thích của hai loại này là khác nhau. Điều này quyết định sự khác biệt giữa kính hiển vi huỳnh quang và kính hiển vi quang học thông thường về cấu tạo và cách sử dụng.
Kính hiển vi huỳnh quang là một công cụ thiết yếu trong hóa tế bào miễn dịch huỳnh quang. Nó được cấu tạo bởi các bộ phận chính như nguồn sáng, hệ thống tấm lọc và hệ thống quang học. Đó là sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định để kích thích mẫu vật phát ra huỳnh quang và quan sát hình ảnh huỳnh quang của mẫu vật bằng cách khuếch đại hệ thống vật kính và thị kính.
