Phương pháp phát hiện kính hiển vi huỳnh quang
kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang là một công cụ cơ bản cho hóa học tế bào miễn dịch huỳnh quang. Nó bao gồm các thành phần chính như nguồn sáng, hệ thống tấm lọc và hệ thống quang học. Nó sử dụng một bước sóng ánh sáng nhất định để kích thích mẫu vật và phát ra huỳnh quang, được phóng đại thông qua hệ thống vật kính và thị kính để quan sát hình ảnh huỳnh quang của mẫu vật (Hình 1).
(1) Nguồn sáng
Ngày nay, đèn thủy ngân siêu cao áp 200W được sử dụng phổ biến làm nguồn sáng. Nó được làm bằng thủy tinh thạch anh, có hình cầu ở giữa và bên trong chứa một lượng thủy ngân nhất định. Trong quá trình hoạt động, sự phóng điện giữa hai điện cực làm thủy ngân bay hơi và áp suất bên trong quả cầu tăng lên nhanh chóng. Khi thủy ngân bay hơi hoàn toàn, nó có thể đạt đến áp suất khí quyển tiêu chuẩn 50-70, thường mất khoảng 5-15 phút. Sự phát quang của đèn thủy ngân siêu cao áp là kết quả của sự phóng điện giữa các điện cực, liên tục phân ly và khử các phân tử thủy ngân và phát ra photon. Nó phát ra ánh sáng cực tím và tím xanh mạnh, đủ để kích thích các chất huỳnh quang khác nhau, do đó, nó được sử dụng rộng rãi trong kính hiển vi huỳnh quang.
Những lưu ý khi sử dụng kính hiển vi huỳnh quang
(1) Tuân thủ nghiêm ngặt các hướng dẫn của nhà máy sản xuất kính hiển vi huỳnh quang và không tự ý thay đổi chương trình.
(2) Việc kiểm tra phải được tiến hành trong phòng tối. Sau khi vào phòng tối, cắm điện và thắp đèn thủy ngân siêu cao áp trong 5-15 phút. Sau khi nguồn sáng phát ra ánh sáng mạnh và ổn định, mắt phải thích ứng hoàn toàn với phòng tối trước khi bắt đầu quan sát mẫu vật.
(3) Để tránh tia UV gây hại cho mắt, nên đeo kính bảo vệ khi điều chỉnh nguồn sáng.
(4) Thời gian kiểm tra mỗi lần là 1-2 giờ. Nếu vượt quá 90 phút, cường độ sáng của đèn thủy ngân siêu cao áp giảm dần và huỳnh quang yếu đi; Mẫu vật tiếp xúc với tia cực tím trong 3-5 ngày
Sau min, độ huỳnh quang cũng giảm đáng kể; Vì vậy, thời lượng tối đa không được vượt quá 2-3 giờ.
(5) Tuổi thọ của nguồn sáng kính hiển vi huỳnh quang có hạn và mẫu vật cần được kiểm tra tập trung để tiết kiệm thời gian
Tiết kiệm thời gian và bảo vệ nguồn sáng. Khi thời tiết nắng nóng nên lắp thêm quạt điện để tản nhiệt, hạ nhiệt. Khi thay bóng đèn mới cần ghi lại thời gian sử dụng ngay từ đầu. Khi đèn tắt và muốn sử dụng lại, bạn phải đợi bóng đèn đủ nguội rồi mới châm lửa. Tránh chiếu sáng nguồn sáng nhiều lần trong ngày.
(6) Quan sát mẫu ngay sau khi nhuộm, vì huỳnh quang sẽ yếu dần theo thời gian. Nếu mẫu được bảo quản trong túi nhựa polyetylen ở nhiệt độ 4 độ, nó có thể trì hoãn thời gian suy giảm huỳnh quang và ngăn chặn sự bay hơi của chất gắn.
(7) Tiêu chí đánh giá độ sáng huỳnh quang thường được chia thành bốn cấp độ, cụ thể là "một" - không có hoặc có thể nhìn thấy huỳnh quang yếu. "+" - Chỉ nhìn thấy huỳnh quang. ++- Có thể nhìn thấy bằng huỳnh quang sáng. "+++" - Huỳnh quang rực rỡ và có thể nhìn thấy được.
