Nguyên lý thực nghiệm phương pháp đếm trực tiếp qua kính hiển vi vi sinh vật
Đếm trực tiếp dưới kính hiển vi bằng máy đo huyết sắc tố là phương pháp thường được sử dụng để đếm vi sinh vật. Ưu điểm của phương pháp này là trực quan và nhanh chóng. Đặt huyền phù vi khuẩn được pha loãng thích hợp (hoặc huyền phù bào tử) vào buồng đếm giữa lam kính và nắp đậy của máy đo huyết sắc tố, và đếm dưới kính hiển vi. Vì thể tích của buồng đếm được cố định (0,1 mm2), nên nó có thể được chuyển đổi thành tổng số vi sinh vật trên một đơn vị thể tích dựa trên số lượng vi sinh vật quan sát được dưới kính hiển vi. Vì phương pháp này đếm tổng số vi khuẩn sống và chết nên còn được gọi là phương pháp tổng số vi khuẩn.
Máy đo huyết sắc tố thường là một slide đặc biệt có bốn khe tạo thành ba bệ. Bệ giữa được chia thành hai nửa bằng một rãnh ngang ngắn. Có một lưới hình vuông được khắc trên bệ ở mỗi bên. Mỗi lưới ô vuông được chia thành chín ô vuông lớn. Hình vuông lớn ở giữa là phòng đếm. Việc đếm vi sinh vật diễn ra trong buồng đếm. Cấu trúc của máy đo huyết sắc tố được thể hiện trong Hình Ⅷ-1.
Thang đo của buồng đếm thường có hai thông số kỹ thuật. Một là hình vuông lớn được chia thành 16 hình vuông vừa, mỗi hình vuông trung bình được chia thành 25 hình vuông nhỏ (Hình Ⅷ-2); cái còn lại là một hình vuông lớn. Lưới hình vuông được chia thành 25 ô vuông trung bình và mỗi ô vuông trung bình được chia thành 16 ô vuông nhỏ (Hình VIII-1, C). Nhưng dù là loại bảng đếm nào thì số lượng ô vuông nhỏ trong mỗi ô vuông lớn đều như nhau, tức là 16×25=400 ô vuông nhỏ, như trong Hình Ⅷ-2.
Độ dài cạnh của mỗi hình vuông lớn là 1mm nên diện tích mỗi hình vuông lớn là 1mm2. Sau khi đậy nắp kính lại, chiều cao giữa mặt kính và nắp kính là 0.1mm nên thể tích của buồng đếm là 0.1mm3.
Khi đếm, thường đếm tổng số vi khuẩn trong năm ô vuông trung bình, sau đó tìm giá trị trung bình của mỗi ô vuông ở giữa, sau đó nhân với 16 hoặc 25 để có tổng số vi khuẩn trong một ô vuông lớn, sau đó tính Chuyển đổi sang tổng số vi khuẩn có trong 1ml dung dịch vi khuẩn.
