Phương pháp đếm trực tiếp vi sinh vật bằng kính hiển vi
Sử dụng máy đo huyết sắc tố để đếm trực tiếp vi sinh vật dưới kính hiển vi là phương pháp thường được sử dụng để đếm vi sinh vật. Ưu điểm của phương pháp này là tính trực quan và tốc độ. Đặt huyền phù vi khuẩn được pha loãng thích hợp (hoặc huyền phù bào tử) vào buồng đếm giữa mặt kính đo huyết sắc tố và mặt kính đậy, rồi đếm dưới kính hiển vi. Do thể tích của phòng đếm không đổi (0,1mm2), tổng số vi sinh vật trên một đơn vị thể tích có thể được chuyển đổi dựa trên số lượng vi sinh vật quan sát được dưới kính hiển vi. Do phương pháp này tính tổng số tế bào vi khuẩn sống và chết nên còn được gọi là phương pháp tổng số vi khuẩn.
Đĩa đếm tế bào máu thường là một phiến kính được thiết kế đặc biệt với bốn rãnh tạo thành ba bệ. Bệ ở giữa được chia đôi bằng một rãnh ngang ngắn, mỗi bên của bệ được khắc một lưới. Mỗi lưới được chia thành 9 ô vuông lớn, ô vuông lớn ở giữa là phòng đếm, nơi tiến hành đếm vi sinh vật. Cấu trúc của tấm đếm tế bào máu được thể hiện trên Hình VIII-1.
Nhìn chung có hai thông số kỹ thuật cho quy mô của phòng đếm. Một là, một hình vuông lớn được chia thành 16 ô vuông ở giữa, mỗi ô vuông ở giữa lại được chia thành 25 ô vuông nhỏ (Hình VIII -2); Một phương pháp khác là chia một hình vuông lớn thành 25 ô vuông ở giữa, mỗi ô vuông ở giữa lại được chia thành 16 ô vuông nhỏ (Hình VIII -1, C). Nhưng bất kể kích thước của bảng đếm, số lượng ô vuông nhỏ trong mỗi ô vuông lớn đều như nhau, tức là 16 × 25=400 ô vuông nhỏ, như trong Hình VIII-2.
Nếu cạnh của mỗi hình vuông lớn là 1mm thì diện tích của mỗi hình vuông lớn là 1mm2. Sau khi đậy bằng một tấm kính che, chiều cao giữa tấm kính và tấm kính là 0,1mm nên thể tích của phòng đếm là 0,1mm3.
Khi đếm, người ta thường đếm tổng số vi khuẩn trong năm ô vuông và sau đó lấy giá trị trung bình của mỗi ô vuông. Nhân nó với 16 hoặc 25 sẽ ra tổng số vi khuẩn trong một hình vuông lớn, sau đó chuyển thành tổng số vi khuẩn có trong 1ml dung dịch vi khuẩn.
