Lợi ích nâng cao của Kính hiển vi đa điểm quét laser
Kính hiển vi đa photon quét bằng laser là một cải tiến đáng kể của kính hiển vi quang học, chủ yếu biểu hiện ở khả năng quan sát các cấu trúc sâu của tế bào sống, tế bào cố định và mô, đồng thời thu được các cấu trúc mặt phẳng Z-nhiều lớp rõ ràng và sắc nét, cụ thể là các lát cắt quang học, có thể được sử dụng để tạo ra các cấu trúc rắn ba chiều của mẫu vật. Kính hiển vi đồng tiêu sử dụng nguồn sáng laser, được mở rộng để lấp đầy toàn bộ mặt phẳng tiêu cự của thấu kính vật kính, sau đó hội tụ thành các điểm rất nhỏ trên mặt phẳng tiêu điểm của mẫu vật thông qua hệ thống thấu kính của thấu kính vật kính. Theo khẩu độ số của vật kính, đường kính của điểm chiếu sáng sáng nhất là khoảng 0,25-0,8 μ m và độ sâu khoảng 0,5-1,5 μ m. Kích thước của tiêu điểm được xác định bởi thiết kế kính hiển vi, bước sóng laser, đặc điểm vật kính, cài đặt trạng thái đơn vị quét và đặc tính của mẫu vật. Phạm vi chiếu sáng và độ sâu của kính hiển vi trường lớn, trong khi độ chiếu sáng của kính hiển vi đồng tiêu tập trung vào một tiêu điểm an toàn trên mặt phẳng tiêu cự. Ưu điểm cơ bản nhất của kính hiển vi đồng tiêu là nó có thể thực hiện phân cắt quang học tinh tế trên các mẫu huỳnh quang dày (lên đến 50 μm hoặc hơn), với độ dày khoảng 0,5 đến 1,5 μm. Bạn có thể thu được loạt hình ảnh lát quang học bằng cách di chuyển mẫu vật lên xuống bằng động cơ bước trục Z{18}}của kính hiển vi. Việc thu thập thông tin hình ảnh được kiểm soát trong mặt phẳng an toàn và sẽ không bị nhiễu bởi các tín hiệu phát ra từ các vị trí khác trên mẫu vật. Sau khi loại bỏ ảnh hưởng của huỳnh quang nền và tăng tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu, độ tương phản và độ phân giải của ảnh đồng tiêu được cải thiện đáng kể so với ảnh huỳnh quang chiếu sáng trường truyền thống. Trong nhiều mẫu vật, các thành phần cấu trúc phức tạp đan xen để tạo thành các hệ thống phức tạp, nhưng khi thu thập đủ các phần quang học, chúng ta có thể sử dụng phần mềm để tái tạo lại chúng theo không gian ba chiều. Phương pháp thí nghiệm này đã được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học để làm sáng tỏ mối quan hệ cấu trúc và chức năng phức tạp giữa các tế bào hoặc mô.
